[发明专利]核酸扩增的检测

权利要求书

1. 一种检测靶多核苷酸序列的方法，其包括：

使探针与包含至少一种靶多核苷酸序列的样品在有效使所述探针形成探针-靶络合物的条件下相接触，其中所述探针包含靶互补片段和可检测标签；

从所述探针切割所述可检测标签；

使被释放的标签与偶联至电极的标签互补物结合，以在电极上形成固定化的标签：标签互补物络合物；

检测与所述标签：标签互补物络合物的存在相关联的电化学信号；以及

使所检测的信号与所述样品中所述靶多核苷酸序列的存在相关联。

2. 权利要求1的方法，其还包括使所检测的信号与所述样品中所述靶多核苷酸序列的量相关联。

3. 权利要求1的方法，其中所述切割所述可检测标签包括酶作用切割所述可检测标签。

4. 权利要求3的方法，其中所述切割包括使用核酸酶切割杂交的探针。

5. 权利要求4的方法，其中在引物延伸过程中切割所述探针，所述方法还包括通过聚合酶链式反应扩增所述靶序列。

6. 权利要求3至5任一项的方法，其中所述切割由DNA聚合酶的5′核酸酶活性介导。

7. 权利要求3至5任一项的方法，其中所述探针包括RNA片段，且所述切割包括使所述探针-靶络合物与具有RNA酶H活性的酶结合。

8. 前述权利要求任一项的方法，其还包括：

使第二探针与所述靶多核苷酸杂交；以及

从杂交的探针切割第二可检测标签。

9. 前述权利要求任一项的方法，其中所释放的可检测标签包含非靶互补多核苷酸序列，且所述标签互补物包含与所述非靶互补多核苷酸序列互补的多核苷酸序列。

10. 前述权利要求任一项的方法，其中所释放的可检测标签包含L-DNA多核苷酸序列，且所述标签互补物包含与所释放的可检测标签中的所述L-DNA多核苷酸序列互补的L-DNA多核苷酸序列。

11. 前述权利要求任一项的方法，其中所述电化学信号是使用与所述标签：标签互补物络合物中双链区结合的电化学介质来产生的。

12. 前述权利要求任一项的方法，其中所释放的可检测标签包含能够与所述标签互补物形成络合物的多核苷酸部分。

13. 权利要求1-11任一项的方法，其中所释放的可检测标签包含能够与所述标签互补物形成络合物的非多核苷酸部分。

14. 权利要求13的方法，其中所述非多核苷酸部分带有负电荷，并且所述标签互补物带有正电荷。

15. 权利要求13的方法，其中所述标签互补物包含聚阳离子部分。

16. 权利要求15的方法，其中所述聚阳离子部分包含多个带有正电荷的含氮杂环部分。

17. 权利要求13的方法，其中所述非多核苷酸部分包含一个或多个巯基，并且所述标签互补物包含金。

18. 权利要求13的方法，其中所述非多核苷酸部分包含聚阴离子部分，并且所述电化学信号是使用静电结合至所述聚阴离子部分的聚阳离子电化学介质产生的。

19. 前述权利要求任一项的方法，其中所述切割在无所述标签互补物的情况下进行。

20. 前述权利要求任一项的方法，其中所述接触包括使所述样品与多种各自互补于不同靶多核苷酸序列的探针接触，并且所述检测包括检测至少两种不同的靶序列。

21. 前述权利要求任一项的方法，其中所述探针的浓度等于或小于800nM。

22. 一种用于检测权利要求1-21任一项所述的靶多核苷酸序列的微流体设备，其包括：

基质，其具有形成于其中的多个微流体室和通道；

覆盖物，其附着于所述基质表面；

入口，其设置成接收含有至少一种靶多核苷酸序列的样品；

一个或多个室，其设置用于使探针与所述样品接触，其中所述探针含有靶互补片段和可检测标签；

一个或多个室，其设置用于使所述样品经受温度控制、从所述探针切割所述可检测标签以及使所释放的标签与偶联至电极的标签互补物结合以形成固定化的标签：标签互补物络合物；以及

仪器，其设置成用于检测与标签：标签互补物络合物的存在相关联的电化学信号以及使所检测的信号与所述样品中所述靶多核苷酸序列的存在相关联。