[发明专利]稳定化的GLP－1类似物

说明书

相关申请

[0001]本申请要求于2005年9月8日提交的美国临时专利申请序列第60/715,322号的优先权权益；该申请的全部内容通过引用被并入。

发明背景

[0002]多肽和肽治疗剂被广泛用于医疗实践中。它们的易于生产，通过重组DNA技术或肽合成仪，确保它们在接下来的若干年中将持续用于各种情况。因此，多肽治疗剂，例如激素、细胞因子和生长因子，代表着重要的一类治疗剂。然而，某些天然多肽，通过蛋白水解或异构化在体内可被迅速灭活。这类灭活在其中期望在一段时期内维持一致的或持续的治疗剂血水平的情况下可能是不便的，因为其后重复给药将是必要的。在某些情况下，该多肽的一种或多种蛋白水解产物可能拮抗完整多肽的活性。在这些情况下，单独施用额外的治疗剂可能不足以克服水解产物的拮抗效应。

[0003]为进一步阐述，在血液中延长的存在时间可能是有益的一种肽激素包括胰高血糖素样肽1(glucagon-like peptide 1，GLP-1)。GLP-1是在葡萄糖代谢和胃肠分泌和代谢中起调节功能的重要多肽激素。当前的成果表明，GLP-1是胰腺中β细胞的生长因子，并可能参与胰腺外的其它器官中的细胞分化。

[0004]GLP-1被认为是由丝氨酸蛋白酶的后脯氨酸切割类(post-proline cleaving class)的成员加以降解，例如二肽基肽酶IV(dipeptidyl peptidase IV，DPP IV)。DPP IV是膜结合的丝氨酸肽酶，其从肽链切割N末端二肽，所述肽链在倒数第二(P1)位含有——优选地——脯氨酸残基或者丙氨酸残基，如果N末端残基(P2)是组氨酸或大的芳族氨基酸例如酪氨酸、色氨酸或苯丙氨酸。GLP-1的氨基末端序列是His-Ala-Glu。因此，DPP IV已被暗示涉及体内GLP-1的活性调节。

[0005]DPP IV介导的、从生物活性肽激素例如GLP-1的N-末端进行的Xaa-Ala或Xaa-Pro二肽的切除——其中Xaa是氨基酸残基，使得它们失活或者甚至是拮抗的。因此，肽激素通过丝氨酸蛋白酶如DPP IV的切割和失活是一个例子，其说明了应用治疗剂多肽的局限性；即，它们在体内短的作用持续时间。由于这个原因，在本领域中存在对于具有GLP-1样活性的作用时间更长的肽的需求。

发明概述

[0006]本发明一般地提供GLP-1类似物，其在体内具有增加的GLP-1样活性持续时间。本发明还提供了GLP-1类似物，其对GLP-1受体具有增加的亲和性。

[0007]一方面，本发明是多肽类似物，其包括：

a)与GLP-1-(7-34)、GLP-1-(7-35)、GLP-1-(7-36)和GLP-1-(7-37)(SEQ ID NOS：1-4)之一至少80％相同的基础氨基酸序列；和

b)一至十五个(天然或非天然存在的)氨基酸残基，其连接于所述基础氨基酸序列的羧基末端，

其中与天然GLP-1相比，所述类似物具有在人类中更长体内持续时间的GLP-1样活性。

[0008]另一方面，本发明是多肽类似物，其包括：

a)与GLP-1-(7-34)、GLP-1-(7-35)、GLP-1-(7-36)和GLP-1-(7-37)(SEQ ID NOS：1-4)之一至少80％相同的基础氨基酸序列；和

b)连接于所述基础氨基酸序列的羧基末端的一至十五个氨基酸残基，

其中GLP-1受体对所述类似物具有比天然GLP-1更高的亲和性。这种类似物还有利地具有GLP-1样活性，所述活性在人类中具有比天然GLP-1更长的体内持续时间。

[0009]在又另一方面，本发明是多肽类似物，其包括：

a)与GLP-1-(7-34)、GLP-1-(7-35)、GLP-1-(7-36)和GLP-1-(7-37)(SEQ ID NOS：1-4)之一至少50％相同的基础氨基酸序列，其中在所述基础氨基酸序列中对应于GLP-1的P’₁残基的氨基酸残基是具有四取代C_β碳的氨基酸类似物；和

b)连接于所述基础氨基酸序列的羧基末端的一至十五个氨基酸残基，

其中所述类似物具有GLP-1样活性，所述活性在人类中具有比天然GLP-1更长的体内持续时间。

[0010]在又一方面，本发明是多肽类似物，其包括：