[发明专利]CD-33特异性的单链免疫毒素及其使用方法

权利要求书

1、一种融合蛋白，该融合蛋白含有：

抗体片段部分，该片段为能够与细胞表面抗原结合的scFv抗体片段； 和

改性的毒性蛋白部分，该毒性蛋白部分通过稳定的肽键结合于所述抗体 片段部分，其中，该毒性蛋白部分包括能促进向细胞内质网中转运的C-末端 序列。

2、根据权利要求1所述的融合蛋白，其中，所述抗体片段能够与CD33 特异性地结合。

3、根据权利要求1或2所述的融合蛋白，其中，所述C-末端序列为SEQ ID NO：1所示的序列。

4、根据权利要求1-3中的任意一项所述的融合蛋白，其中，所述毒性 蛋白为假单胞菌外毒素A的变体。

5、根据权利要求4所述的融合蛋白，其中，所述改性的毒性蛋白部分 假单胞菌外毒素A的变体缺失了结合结构域。

6、根据权利要求4所述的融合蛋白，其中，所述改性的毒性蛋白部分 假单胞菌外毒素A的变体包括假单胞菌毒素的结构域II和III以及作为内质 网滞留基序的KDEL四肽。

7、一种制剂，该制剂含有：

药学上可接受的载体；和

融合蛋白，该融合蛋白含有抗体片段部分和改性的毒性蛋白部分，该抗 体片段为能够与细胞表面抗原结合的scFv抗体片段；该毒性蛋白部分通过 稳定肽键结合于该抗体片段部分，其中，该毒性蛋白部分包括能促进向细胞 内质网中转运的C-末端序列。

8、一种治疗方法，该方法包括：

对患有与表达CD33细胞表面抗原的细胞相关的疾病的患者进行诊断； 和

用治疗有效剂量的制剂对所述患者进行给药，该制剂含有药学上可接受 的载体和融合蛋白，该融合蛋白含有能够与CD33特异性地结合的scFv抗体 部分，该抗体部分通过肽键结合于含有由KDEL肽组成的C-末端序列的毒 性蛋白部分。

9、根据权利要求8所述的方法，其中，所述疾病为急性骨髓白血病。

10、根据权利要求9所述的方法，其中，被诊断为急性骨髓白血病的所 述患者为接受了前期治疗后复发的急性骨髓白血病患者。

11、根据权利要求8所述的方法，其中，所述疾病为儿科急性成淋巴细 胞性白血病。

12、根据权利要求8-11中的任意一项所述的方法，该方法还包括：在 一段时间内使用所述制剂对所述患者进行反复给药并在这段时间内对该患 者进行监控。

13、一种诱导人细胞凋亡的方法，该方法包括：

将选自U937、HL-60和THP-1的细胞系与融合蛋白接触，其中，该融 合蛋白含有抗体片段部分，该抗体片段部分与U937、HL-60和THP-1中的 任何一种细胞系进行结合的亲和力为1×10^-6M或更高，该抗体片段部分通过 稳定的肽键结合于改性的毒性蛋白部分，其中，该改性的毒性蛋白部分为假 单胞菌外毒素A的变体，并且该假单胞菌外毒素A的变体还含有四肽KDEL。

14、根据权利要求13所述的方法，其中，所述抗体片段部分与CD33 进行结合的亲和力为约1×10^-7M。

15、根据权利要求13或14所述的方法，其中，所述假单胞菌外毒素A 的变体缺失了完整假单胞菌外毒素A的可靠结合结构域。

16、根据权利要求13-15中的任意一项所述的方法，其中，所述融合蛋 白以约50-2,000ng/ml的浓度与细胞接触。