[发明专利]PDGF受体的刺激性自身抗体作为病理学标记和治疗靶点

说明书

技术背景

患自体免疫性疾病，系统性硬化病或硬皮病的患者血清中含有人 PDGF受体(PDGFR)的刺激性自身抗体。PDGFR是PDGFRA NP008197(SWProt P16234)和PDGFRB NP0026000(SWProt P09619) 的同型或异型二聚分子。这些抗体可被用作诊断疾病的工具。此外， 使用抗-PDGFR的抑制剂治疗可以代表此疾病的一种治疗方法。

目前，尽管罕见(1/10,000)，此种疾病是致命性的并且没有特 异疗法。诊断基本上根据临床症状并且没有特异检测方法。

这种自身抗体的检测可用于除系统性硬化病外的另两种更常见疾 病：

-雷诺现象，在人群中的发病率是20％，尽管有些患者会进展为 系统性硬化病，但其通常是良性的。抗体检测可以鉴别原发性和继发 性雷诺现象，继发性雷诺是系统性硬化病的早期征象。

-移植物抗宿主反应(GVHR)，是一种经常发生于同种异体器官 移植，主要是骨髓移植后的并发症。我们已经检测了所有伴慢性GVH 和纤维化患者(15)(目前为止所分析的)中上述抗体的存在。

系统性硬化病(硬皮病；SSc)是以皮肤和内脏器官纤维化为特征 的紊乱(1)。该疾病原发病因未知。目前为止，还没有明确和特异的 假说能够解释该疾病的所有方面。

硬皮病的一些表型特征已经确立并且能够代表该疾病的特点：1. 内皮细胞损伤和2.过量的胞外基质的产生(2)。细胞硬皮病表型以 氧化应激和成纤维细胞产生的大量活性氧(reactive oxygen species， ROS)为特征(3-6)。ROS是成纤维细胞增殖(7)和胶原蛋白基因表 达(7)的关键细胞传感器(transducers)。经由Ha-Ras和ERK1-2 产生的大量ROS诱导胶原蛋白基因转录和正常成纤维细胞老化(7)。 血小板源性生长因子(PDGF)可诱导ROS和Ras-ERK1/2信号转导(9)； 此外，来源于硬皮病患者的IgG(SSc IgG)被证实可与人成纤维细胞 发生反应(10)。

发明描述

本发明的作者已探查了SSc患者血清中Ha-Ras/ERK1-2和ROS的 刺激性分子。

他们提供证据表明，通过引发PDGFR活化，针对PDGF受体(PDGFR) 的刺激性的IgG自身抗体，经Ha-Ras和ERK1-2信号转导诱导ROS， 并造成成纤维细胞活化和内皮细胞凋亡，而它们是系统性硬化病的显 著特征。

因此，他们发现了一个新水平的Ras蛋白调节，这依赖于ERK1/2 信号转导。具体而言，他们发现PDGF和ROS诱导原代成纤维细胞中的 Ha-Ras。这揭示了一种新的，迄今为止尚不知晓的途径，这一途径将 ROS与Ras蛋白水平通过ERK1/2联系起来。他们在系统性硬化病患者 来源的细胞中发现了这一在体环路的显著例子。这一信号转导途径经 刺激PDGF受体而启动并由ROS-ERK1/2信号维持。系统性硬化病的细 胞产生过量的ROS(12)并维持活性Ras-ERK1/2。这些细胞蓄积DNA 损伤，活化ROS依赖性基因并易于发生应激诱发的凋亡。抑制ROS、 Ras或ERK1/2可以下调在系统性硬化病成纤维细胞中的这一环路 并恢复正常表型。这些数据指出Ras是细胞ROS的关键感受器并提示 了一种诊断和治疗系统性硬化病的分子工具。

因此，本发明的一个目的是一种体外检测身体样品中PDGF受体自 身抗体存在的方法，其特征为：

a)将身体样品与有效量的这种自身抗体的特异性配体在允许二者 结合并形成复合物的条件下孵育；

b)检测结合的自身抗体或复合物，如果它们存在的话。

优选特异性配体是PDGF受体或其免疫反应性片段或衍生物。

更优选这种免疫反应性片段属于PDGRA和/或PDGFRB的胞外区， 最优选它包括在人PDGFRA NP008197，(SWProt P16234，SEQ ID No.7) 和/或PDGFRB NP0026000(SWProt P09619，SEQ ID No.8)氨基酸 序列中NH端的前550个氨基酸中。

SWProt P16234，SEQ ID No.7