[发明专利]来自破囊壶菌属(Thraustochytrid)的△6去饱和酶及其用途

权利要求书

1. 分离的核酸序列或其片段，其包含编码具有Δ-6-去饱和酶活 性的多肽的核苷酸序列，或与所述核苷酸序列互补，其中所述核酸序 列分离自裂殖壶菌(Schizochytrium)SC1。

2. 分离的核酸序列或其片段，其包含与权利要求1的核酸序列 具有至少70％、优选80％、最优选90％同一性的核苷酸序列，或与所 述核苷酸序列互补，其中权利要求1的核酸序列包含SEQ ID NO：1 的核苷酸序列。

3. 分离的核酸序列或其片段，其包含权利要求1的编码具有Δ-6- 去饱和酶活性的多肽的核苷酸序列，或与所述核苷酸序列互补，其中 所述多肽的氨基酸序列与SEQ ID NO：2的氨基酸序列具有至少70％、 优选80％、最优选90％同一性。

4. 上述权利要求任一项的分离的核酸序列，其中所述序列编码 功能活性的Δ-6-去饱和酶，所述酶用多不饱和脂肪酸作为底物。

5. 表达载体，其包含权利要求1-4中任一项的分离的核酸序列， 所述核酸序列操作性连接到能够影响所述分离的核酸表达基因产物 的启动子和终止信号。

6. 权利要求5的表达载体，其中所述启动子为Gal1启动子。

7. 表达载体，其如图4所示。

8. 酵母细胞，其已用权利要求5或6或7的表达载体转化。

9. 用分离的核酸序列转化的酵母细胞，所述核酸序列编码具有 将结合脂质的脂肪酸去饱和活性的蛋白质，其中由所述核酸序列编码 的Δ-6-去饱和酶将多不饱和脂肪酸特异性地转化为ω-3脂肪酸。

10. 生产多不饱和脂肪酸的方法，所述方法包括以下步骤：

(i)用部分Δ-4去饱和酶基因进行cDNA文库筛选，导致鉴定 出部分cDNA克隆；

(ii)用部分cDNA克隆筛选裂殖壶菌SC-1的BAC文库，以便 鉴定阳性BAC克隆；

(iii)对所述阳性BAC克隆进行鉴定和测序，并进一步鉴定全 长序列内的Δ-6去饱和酶ORF；

(iv)构建包含操作性连接到调节序列的所述分离的核酸序列 的载体；

(v)在足以表达所述去饱和酶的条件和时间下，用所述构建体 转化宿主细胞，宿主细胞特别是酵母细胞，更特别是。

11. 包含至少一种多不饱和脂肪酸的组合物，所述多不饱和脂 肪酸选自按照权利要求10的方法生产的多不饱和脂肪酸产物。

12. 权利要求11的组合物，其中所述组合物选自婴儿配方奶粉、 膳食补充品和膳食替代品。

13. 权利要求11的组合物，其中所述组合物给予人或动物。

14. 权利要求11的组合物，其中所述组合物经肠道给予或胃肠 外给予。

15. 预防或治疗由多不饱和脂肪酸摄取不足引起的病症的方 法，该方法包括将权利要求11的组合物以足以实现所述预防或治疗 的量给予所述患者。