[发明专利]结核相关免疫恢复综合征（IRS）的诊断方法

权利要求书

1、一种在结核分枝杆菌(TB)重叠感染病人中以及仅感染TB的 病人中体外诊断免疫恢复综合征(IRS)的方法，包括以下步骤：

a)在培养基中将所述的病人的外周血单核细胞(PBMC)或全血 与选自称为PPD(纯化蛋白衍生物)的分枝杆菌提取物的分枝杆菌抗 原和/或16kDa蛋白(SEQ ID No.1)共同培养；

b)在培养基中将所述的病人的外周血单核细胞(PBMC)或全血 与至少一种来源于结核分枝杆菌的抗原共同培养作为阴性对照，该抗 原选自ESAT-6(SEQ ID No.2)、CFP-10(SEQ ID No.3)或85B(SEQ ID No.4)；以及

c)对比步骤b)中该分枝杆菌抗原，检测步骤a)中对该分枝杆菌 抗原的Th1应答水平，

其中与对b)中限定的抗原相比，或与未刺激细胞相比或与非分枝 杆菌抗原刺激的对照细胞相比，Th1应答增加超过250％，或在上述比 较中，同一个时间点测量的对a)中限定的抗原的Th1应答有强反应性 时表示IRS。

2、根据权利要求1所述的方法，其中步骤b)包括通过ELISPOT 测定法或细胞内细胞因子染色法联合流式细胞计量术或荧光显微镜检 查和定量法对抗原特异性T细胞进行定量。

3、根据权利要求2所述的方法，其中包括定量分枝杆菌特异性产 生IFN-γ的Th1细胞。

4、根据权利要求2或3所述的方法，其中结果超过500SFC(斑 点形成细胞)/10⁶PBMC，例如减去单独根据细胞获得的平均背景后， SFC超过500、1000或2000，表示IRS；而同时对ESAT-6、CFP-10、 85B的SFC为零或最小，如SFC典型的低于500/10⁶PBMC或低于 400或300。

5、根据权利要求1到4中任意一项所述的方法，其中步骤b)包 括收集培养上清液及定量至少一种Th1特异性细胞因子或趋化因子， 包括IL-2、IL-2R、IL-12p40、IL-15、IL-17、IFN-γ、TNF-α、GMCSF、 MIP-1α、MIP-1β、MCP-1、MIG、RANTES、IP-10。

6、根据权利要求5所述的方法，其通过多路夹心免疫测定法或单 个细胞因子特异性夹心免疫测定法来进行。

7、根据权利要求5所述的方法，其中IFN-γ产量通过ELISA定 量。

8、根据权利要求1到7中任意一项所述的方法，其中步骤a)中 外周血单核细胞培养约6小时到72小时。

9、根据权利要求1到8中任意一项所述的方法，其中步骤a)中 外周血单核细胞与约1μg/ml的PPD和/或约1μg/ml16kDa蛋白共同 培养以及单独与约1μg/ml的ESAT-6重组蛋白共同培养。

10、根据权利要求1到9中任意一项所述的方法，其中步骤a)中 外周血单核细胞与约1μg/ml的PPD和/或约1μg/ml16kDa蛋白共同 培养以及单独与CFP-10和/或85B共同培养。

11、根据权利要求1到10中任意一项所述的方法，其中对照细胞 选自与CMV提取物、HIV-1 p24、植物血细胞凝集素和仅培养基本身 共同培养的细胞。

12、根据权利要求1到11中任意一项所述的方法，其在有结核重 叠感染的HIV阳性病人的高效抗逆转录病毒治疗(HAART)过程中进 行。

13、根据权利要求1到12中任意一项所述的方法，其在同时或顺 次接受HAART和结核治疗的病人中进行。

14、根据权利要求1到11中任意一项所述的方法，其在仅感染结 核的病人中进行。