[发明专利]结核相关免疫恢复综合征（IRS）的诊断方法

说明书

本发明涉及在结核(TB)感染病人及在HIV(人类免疫缺陷病毒) 重叠感染病人中结核相关免疫恢复综合征(Immune Restoration Syndrome associated with tuberculosis，TB-IRS)的诊断方法和诊断试剂 盒，其包括检测急性Th1应答，在暴露于称为结核菌素或PPD(纯化 蛋白衍生物)的分枝杆菌提取物和/或16kDa蛋白，而非暴露于来源 于结核分枝杆菌的ESAT-6或CFP-10抗原后进行检测。

背景技术

免疫恢复综合征(IRS)最初在接受齐多夫定单药治疗的感染鸟分 枝杆菌复合菌组(Mycobacterium avium complex)的HIV感染病人中得 到描述[1]，在高效抗逆转录病毒治疗(HAART)时代，它在结核患 者中发生的频率极高(29％-36％)[2]。IRS也发生在HIV阴性病人起 始TB治疗后，尽管频率较低。

经典地，IRS发生在未进行过HAART治疗的结核(TB)和HIV 重叠感染病人中，在HIV感染晚期，当两种治疗同时起始或起始两种 治疗的间隔时间不长时。通常，临床症状包括发热、淋巴结病、呼吸 困难和其它TB的最初症状[2]。有人提出定义IRS的主要标准[3] 是任何基础性的机会性事件包括非典型的出现机会性感染(OI)或病 人对HAART反应的肿瘤(血浆HIV RNA水平降低大于1log₁₀拷贝 /ml)，没有任何其它解释(药物抵抗，其它OI)以及有免疫恢复的证 据，最后一项作为次要标准。

然而，IRS引出了三个临床相关的问题：首先，诊断困难，因应区 别IRS与治疗失败或抵抗或其它机会性疾病；其次，在有些危及生命 的病案中，IRS治疗仍是基于类固醇的试验性治疗，而这在此类免疫妥 协的病人中是不易引入的；第三，确定IRS危险度系数有助于临床医 生确定治疗策略，即延迟或不引入HAART[4]。

因此，当前仍强烈需要对IRS可靠的诊断试验。IRS的病理生理学 仍未完全阐明。已证明在IRS过程中产生急性促炎症反应细胞因子 (IL-6)[5、6]，但其来源未知。此外，一个有力的主导性假说认为IRS 应与HAART降低血浆病毒载量(VL)后，分枝杆菌特异的T淋巴细 胞与记忆性T细胞再循环或增殖的反应有关[7、8]。除了对PPD的 DTH皮试恢复之外，这一假说仅是建议，并未证实[9]。相似地在HIV 阴性TB感染病人中，假说认为IRS反映了TB特异性Th1免疫的加重。

与本发明相关，我们对HIV和TB重叠感染的病人进行了前瞻性 多中心研究。我们发现在IRS过程中，分枝杆菌特异性的(PPD)Th1 产生IFN-γ的细胞急剧增加，而检测的CMV-、HIV p24-特异性应答作 为对照并未增加。此外，仅有极少的IRS+病人在IRS过程中有ESAT-6 特异性应答，尽管应答水平不高；且IRS-病人并不发生急性PPD特异 性应答。这些发现与PPD特异性Th1细胞因子如IFN-γ、IL-2、IL-12、 IP10、MIG的峰值相关，但我们并未检测Th2细胞因子；也检测了其 它炎症趋化因子或细胞因子如TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-10、RANTES、 MCP-1。我们也鉴定出对16kDa蛋白抗原刺激应答的Th1特异性细胞 因子的急性释放。

因而，在此我们提供一种新的TB-IRS诊断试验，其包括在HIV和 TB重叠感染的病人中以及在仅感染TB的病人中检测对分枝杆菌抗原 的Th1应答的急性加重。

发明内容

在第一个实施方案中，本发明的目的在于提供结核分枝杆菌(TB) 重叠感染病人中以及仅感染结核的病人中体外诊断免疫恢复综合征 (IRS)的方法，包括以下步骤：

a)在培养基中将所述的病人的外周血单核细胞(PBMC)或全血 与选自称为PPD(纯化蛋白衍生物)的分枝杆菌提取物的分枝杆菌抗 原和/或16kDa蛋白(SEQ ID No.1)共同培养，

b)在培养基中将所述的病人的外周血单核细胞(PBMC)或全血 与至少一个来源于结核分枝杆菌的抗原共同培养作为阴性对照，该抗 原选自ESAT-6(SEQ ID No.2)、CFP-10(SEQ ID No.3)或85B(SEQ ID No.4)，以及

c)对比步骤b)中该分枝杆菌抗原，检测步骤a)中对该分枝杆菌 抗原的Th1应答水平，