[发明专利]标记物是Eph型标记物的细胞/配体标记系统，包含所述系统的细胞材料，其制备方法，和促血管生成的用途

说明书

发明领域

本发明涉及新的技术解决方案，其利用包含细胞标记物和特异于所述标记物的配体的系统，其中所述标记物选自由Eph组成的组，尤其是Eph4标记物。它也涉及包含该系统的细胞材料和制备它的方法，以及其用作促血管生成剂的治疗用途。

现有技术

已知最初在神经系统中证明用于神经元引导的肝配蛋白(ephrin)家族成员和它们的Eph受体酪氨酸激酶是涉及血管生成的因子。Eph受体和它们的肝配蛋白配体的许多同种型被描述成具有组织表达特异性。在脊椎动物中，首先，至少有16种Eph受体是已知的，即：10种EphA受体(EphA1至EphA10)和6种EphB受体(EphB 1至EphB6)；其次，至少有9种肝配蛋白配体是已知的，即：肝配蛋白-A1至肝配蛋白-A6，和肝配蛋白-B1至肝配蛋白-B3。起先分成EphA和EphB两类，是基于它们胞外域序列的同源性，但该分类也与它们配体的优先结合一致，肝配蛋白-A配体一般通过糖基磷脂酰肌醇(GPI)与膜结合，而肝配蛋白-B配体是穿膜的，其带有具有PDZ结合结构域的胞质内结构域。

如下文图1所示：

Eph受体包含胞外域、III型纤连蛋白重复区、富含半胱氨酸的区域和特异性配体结合结构域；它在胞内域中也有延伸，包含有酪氨酸激酶活性的结合域、不育性α模组(SAM)和PDZ结合模组；

肝配蛋白-A配体通过GPI(GPI锚)附着于膜；而且

肝配蛋白-B穿膜配体具有胞内延伸物，包含细胞质尾巴和PDZ结合模组。

在Eph受体酪氨酸激酶(尤其是EphB4)和其配体(尤其是肝配蛋白-B2)(其为穿膜蛋白)间相互作用方面，发生双向信号传递，其包括在其表面表达Eph的细胞的Eph受体所诱导的信号传递(正向信号传递)，和在其表面表达肝配蛋白的细胞的肝配蛋白配体所诱导的反向信号传递。该双向信号传递在细胞/细胞接触、迁移和细胞粘附中起作用。

由H.U.Wang等的文章(“Molecular distinction and angiogenic interactionbetween embryonic arteries and veins revealed by ephrin-B2 and its receptorEphB4”，Cell，1998；93：741-753)可知动静脉表达EphB4/肝配蛋白-B2偶联物的特异性，EphB4仅由静脉表达，而肝配蛋白-B2仅由动脉表达。

EphB受体和它们的肝配蛋白-B配体特别会在胚胎发育期间表达。根据Z.Wang等的“Ephrin receptor，EphB4，regulates ES cell differentiation ofprimitive mammalian hemangioblasts，blood，cardiomyocytes and bloodvessels”，Blood，2004；103：100-109，EphB4似乎涉及小鼠胚胎细胞(ES)分化成内皮细胞。

也已知某些Eph受体(尤其是EphB4)在肿瘤中过表达。该观察结果提示，这些Eph受体在肿瘤发展中起作用。N.K.Noren等的文章“Interplaybetween EphB4on tumor cells and vascular ephrin-B2regulates tumor growth”，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，101：5583-5588，证明了通过EphB4活化肝配蛋白-B2(反向信号传递)能刺激肿瘤生长。

在另一方面，现有文献中观察到的有：(i)在肿瘤发生期间肝配蛋白-B2的表达增加，而且其次(ii)由于有这样的增加，因而担心肝配蛋白-B2可能能够诱导肿瘤。这解释了为什么几篇公开出版物建议：一方面检测作为肿瘤标记物的肝配蛋白-B2，另一方面抑制肝配蛋白-B2；尤其参见(i)WO02/058538A，其推荐检测肝配蛋白-B2配体作为肿瘤维管结构标记物，并描述了显现这种肿瘤维管结构的技术，(ii)US2003/0207447A，其建议使用Eph(尤其是EphB4)抑制剂或肝配蛋白(尤其是肝配蛋白-B2)抑制剂，通过阻止受体和配体间相互作用来限制血管生成，和(iii)US6864227A和WO03/102144A，其推荐使用抗Eph抗体(尤其是抗EphB4抗体)或抗肝配蛋白抗体(尤其是抗肝配蛋白-B2抗体)来减少或调节血管生成。

简而言之，涉及Eph/肝配蛋白结合对的公开的专利文件尤其关注特别涉及如下的方法：