[发明专利]鉴定人早期癌症、癌症发展和复发标志物的方法

权利要求书

1.一种鉴定癌症分泌的标志蛋白的方法，所述方法包括：

a)用含有报道基因的HIV-1慢病毒-基因-捕获载体转染恶性程度不同、已 经向非恶性状态回复的多种人癌细胞；

b)鉴定能在体外分泌报道物连接蛋白的报道物表达细胞系；

c)将已鉴定到的各报道物表达细胞系的克隆植入动物中；

d)鉴定在血清中分泌报道物连接蛋白的植入的报道物表达细胞系克 隆；和

e)鉴定步骤d)中恶性程度从低到高的各阶段的人癌细胞特异性分泌的 报道物连接蛋白；

其中，鉴定到的蛋白质是各癌症阶段的标志。

2.如权利要求1所述的方法，还包括：

f)鉴定非恶性人癌细胞再次回复成各阶段恶性细胞的癌症发展的特异 性分泌的报道物连接蛋白；

其中，鉴定到的蛋白质是癌症发展和复发的标志。

3.如权利要求2所述的方法，还包括：

g)比较向恶性发展的恶性程度低的人癌细胞中体外和体内分泌的报道 物连接蛋白。

4.如前述权利要求中任一项所述的方法，其特征在于，所述报道物是GFP， 其中步骤b)还包括：

b1)用RFP转化向正常状态回复的转染癌细胞；

b2)分离和克隆GFP+细胞；

b3)培养GFP+克隆；

b4)鉴定GFP+荧光克隆；和

b5)从鉴定到的荧光克隆中鉴定分泌GFP-蛋白的细胞。

5.如前述权利要求中任一项所述的方法，在步骤d)之后还包括， 制备体内分泌报道物-或GFP-蛋白的细胞文库。

6.如权利要求1、2或3所述的方法，其特征在于，所述报道基因是GFP 或β-内酰胺酶。

7.如前述权利要求中任一项所述的方法，其特征在于，所述含有报道基 因的HIV-1慢病毒基因-捕获载体是HIV-1慢病毒-GFP-捕获载体。

8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，所述HIV-1慢病毒-GFP-捕获 载体是pZR-1或pZR-2。

9.如前述权利要求中任一项所述的方法，其特征在于，所述植入克隆选 自前列腺癌、睾丸癌、肺癌、肝细胞瘤、绒毛膜癌、乳腺癌或结肠癌细胞。

10.一种用前述权利要求中任一项所述方法鉴定的蛋白质。

11.一种包含各种恶性程度的人癌细胞的文库，其中所述细胞含有随 机捕获的基因，各自含有报道基因。

12.如权利要求11所述的文库，其特征在于，所述报道基因能表达绿色 荧光蛋白(GFP)。

13.如权利要求11所述的文库，其特征在于，所述细胞的亚组含有能编 码分泌蛋白的报道物捕获基因。

14.一种权利要求13所述细胞文库的报道物捕获基因文库，其中所述报 道物捕获基因能够表达体外分泌的蛋白质。

15.一种权利要求13所述细胞文库的报道物捕获基因文库，其中所述报 道物捕获基因能够表达体内分泌的蛋白质。

16.如权利要求11所述的文库，其特征在于，当所述癌细胞具有特定的 恶性程度时，所述报道物捕获基因能够表达体外或体内分泌的蛋白质。

17.如权利要求16所述的文库，其特征在于，所述癌细胞具有的恶性程 度能够侵入或转移。

18.如权利要求17所述的细胞文库，其特征在于，所述报道物捕获基因 能够表达体外和体内分泌的蛋白质，并且在移植了表达该报道物捕获基因的 细胞后在啮齿动物血清中可以检测到。

19.一种能够表达用权利要求1-9中任一项所述方法鉴定的癌症发展标志 蛋白的分离基因的文库，其中在肿瘤发展的特定步骤中所述基因不含报道基 因或基因-捕获载体。