[发明专利]鉴定人早期癌症、癌症发展和复发标志物的方法

说明书

技术领域

本发明提供了鉴定癌症分泌的标志蛋白的方法。具体说，本发明采用的基 因捕获技术能检测基因表达的变化。

背景技术

癌症死亡率主要由于诊断太晚所致，癌症发展到晚期时现有的治疗方法已 无效。虽然采用质谱和其它技术的蛋白质组学能够特征鉴定血清、血浆和尿中 的蛋白质，但对大多数癌症类型而言，仍然缺少有用的早期标志物(Rai等，Ann. NY Acad.Sci.(2004)1022：286-294；Diamandis，J.Natl.Cancer Inst.(2004) 96：353-356)。

组织学曾采用抗肿瘤细胞提取物的单克隆抗体来鉴定候选的肿瘤标志物 (Fidler，Cancer Research(1978)38：2651-2660)。对这些候选物的筛选和评价已 成为鉴定新型肿瘤标志物的传统方法。然而，这种技术有局限性，在评价大量 候选标志物时劳动强度高而且耗时。

对特定癌症类型的灵敏和特异性标志物的鉴定也很困难。对大多数癌症类 型的诊断、预后、分期、复发和检测残留的很少癌症的标志物鉴定仍有困难。

目前用于分析血清的SELDI-TOF质谱技术无法检测到浓度低于1μg/mL 的任何血清组分(Lai等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA(2002)99：3651：3656)。但此 浓度范围比循环系统中已知肿瘤标志物的浓度高约1000倍(表1)(Lai，同上)：

表1

 蛋白质   大约浓度，   pmol/L   癌症类型  经典的肿瘤标志物  甲胎蛋白  前列腺-特异性抗原  癌胚抗原  人绒毛膜促性腺素  人绒毛膜促性腺素-β亚基   150   140   30   20   2   肝细胞瘤、睾丸癌   前列腺   结肠癌、肺癌、乳腺癌   睾丸癌、绒毛膜癌   睾丸癌、绒毛膜癌

参考文献：Diamandis，同上。

基因-捕获载体可标记内源基因，使得能够检测基因表达的变化。标记基 因使得能够研究相应基因的特异性启动子和功能。然而，基因-捕获载体(大部 分是质粒或逆转录病毒的载体)的局限性是效率低、表达时期短暂或限于分裂 细胞。近年来开发的基于HIV-1的慢病毒载体克服了这些障碍，已逐渐提高了 其在体外基因递送中的应用。这些载体能导致在体内中枢神经系统(CNS)、造 血系统、视网膜、肌肉、肝脏和胰岛的细胞中长期的基因表达(Lai，同上)。

HIV-1慢病毒载体可整合到分裂和未分裂的细胞基因组中，而稳定表达转 基因。已经开发了两种基于HIV-1的慢病毒载体衍生物pZR-1和pZR-2，用于 哺乳动物细胞的体外和体内基因捕获(Lai，同上)。这些慢病毒基因-捕获载体 所含的报道基因或是β-内酰胺酶或是绿色荧光蛋白(GFP)，插入在3′长末端重 复序列的U3区中。采用方便的感染技术很容易将这两种捕获载体整合到宿主 基因组中，而导致GFP或β-内酰胺酶表达。这种技术有助于快速富集和克隆 捕获的细胞。这种报道基因可由上游细胞特异性启动子驱动(Lai，同上)。

发明内容