[发明专利]浓缩的液体酶添加剂的稳定化

说明书

发明领域

本发明涉及浓缩的液体酶添加剂的稳定化以防止沉淀。本发明还涉及制备所述的液体酶添加剂的方法。 

发明背景 

在含酶液体中的存储稳定性问题是众所周知的。特别是在含酶液体洗涤剂中，尤其当洗涤剂含有蛋白酶时，确保随时间稳定的酶活性是个大难题。 

现有技术广泛涉及到改进存储稳定性，例如通过添加蛋白酶抑制剂改进存储稳定性。 

已知硼酸(boric acid)和硼酸(boronic acids)可逆地抑制蛋白水解酶。对一种丝氨酸蛋白水解酶，即枯草杆菌蛋白酶(subtilisin)的抑制的讨论在Molecular & Cellular Biochemistry 51，1983，pp.5-32中提供。 

硼酸作为枯草杆菌蛋白酶抑制剂具有非常不同的能力。只含有烷基如甲基、丁基或2-环己基乙基的硼酸是弱抑制剂，其中甲基硼酸作为最弱的抑制剂，而含有芳基如苯基、4-甲氧基苯基或3，5-二氯苯基的硼酸是强抑制剂，其中3，5-二氯苯基硼酸作为特别有效的抑制剂(参见Keller et al，Biochem.Biophys.Res.Com.176，1991，pp.401-405)。 

据称含有相对于硼在3-位具有取代的芳基硼酸是出乎预料好的可逆蛋白酶抑制剂。特别地，据称乙酰氨基苯基硼酸(acetamidophenyl boronic acid)为蛋白水解酶的优良抑制剂(参见WO 92/19707)。 

在EP 0 832 174中，发现在对位以邻接于苯基硼酸的＞C＝O取代的苯基硼酸衍生物在液体中具有异常好的作为酶稳定剂的能力。 

然而，当解决酶的稳定化问题时，出现了另一个问题。当在液体酶添加剂中使用硼酸或硼酸衍生物诸如4-甲酰基苯基硼酸(4-FPBA)以稳定酶时，出现了在制备过程中和储存后形成沉淀，这当然是不需要的副作用。 

发明概述 

因此，本发明的一个目的是提供液体酶添加剂，其包括酶和硼酸或硼酸的衍生物，其在制备过程中或存储后不形成沉淀。本发明的另一个目的是提供制备形成沉淀最少的所述液体酶添加剂的方法。 

令人惊奇地发现，将表面活性剂加入液体酶添加剂显著地降低存储过程中形成的沉淀量。 

由此在本发明的第一方面中，本发明提供了浓缩的液体酶添加剂，其包括酶、苯基硼酸或其衍生物和表面活性剂，其中所述酶以多于1.5g/L的量存在。 

在第二方面中，本发明提供了用于制备浓缩的液体酶添加剂的方法，其包括下列步骤： 

i)提供液体酶制剂； 

ii)将i)的液体与硼酸或其衍生物混合； 

iii)在步骤ii)之前或之后或者与硼酸或其衍生物一起，将表面活性剂加入液体酶添加剂中。 

本发明还涉及所述浓缩的液体酶添加剂的用途。 

发明详述 

定义 

HLB值： 

HLB(亲水-亲脂平衡)值是一种标为1至20的指标(index)。 

HLB系统是预测分子结构将提什么类型的表面活性剂性质的半经验方法。HLB系统是基于如下观念：一些分子具有亲水基团；另一些分子具有亲脂基团；而一些分子两者兼有。每种基团在分子或混合物中的重量百分比预示了分子结构将显示何种特性(behavior)。油包水乳化剂具有低HLB数值，通常为大约4。增溶剂具有高的HLB数值。水包油乳化剂具有中间到高的HLB数值。 

HLB是亲水-亲脂平衡，如W.C.Griffin，″Calculation of HLB Values of Non-Ionic Surfactants，″Journal of the Society of Cosmetic Chemists 5(1954)：p249所述。 

表面活性剂： 

作为表面活性剂的化学药品。此术语包括起到乳化剂、分散剂、油润湿剂、水润湿剂、起泡剂和消泡剂作用的多种材料。表面活性剂特性的类型，作为乳化剂或分散剂或其它，取决于分子(或分子混合物)上的结构基团。 

pH：