[发明专利]单链引物-启动子-选择子构建体的IVT的应用

权利要求书

1.一种用于检测样品中靶标子序列的存在或相对量的引物-启动子- 选择子构建体，其包括以下三个子序列：

与所述靶标子序列互补的引物子序列，其5’末端与启动子子序列3’ 末端相邻，所述启动子子序列能够引导选择子子序列的转录，所述选择子 子序列3’末端与所述启动子子序列的5’末端相邻，其中所述选择子子序列 和其互补序列被设计为不与所述样品中预期存在的任何子序列退火。

2.如权利要求1的构建体，其中所述启动子不引导所述引物子序列 的转录。

3.如权利要求1的构建体，其中所述启动子为T7或T3或SP6启动 子子序列。

4.如权利要求1的构建体，其中所述引物子序列能与模板退火和延 伸。

5.如权利要求1的构建体，其包括可识别的标签。

6.如权利要求1的构建体，其中所述选择子子序列作为体外转录的 模板。

7.一种试剂盒，其包括：多种不同类型的引物-启动子-选择子构建体 和一组寡核苷酸，

其中所述构建体各自用于检测样品中不同靶标子序列的存在或相对 量，所述构建体各自包括以下三个子序列：与所述靶标子序列互补的引物 子序列，其5’末端与启动子子序列3’末端相邻，所述启动子子序列能够引 导选择子子序列的转录，所述选择子子序列3’末端与所述启动子子序列的 5’末端相邻；

其中具有不同序列的所述寡核苷酸展示在不同编码的微颗粒上，并且 其中所述寡核苷酸能够与所述选择子子序列的转录产物退火。

8.如权利要求7的试剂盒，其中所述不同类型的构建体各自的引物 子序列和选择子子序列不同。

9.如权利要求8的试剂盒，其中每个类型的构建体有不同的引物子 序列和相同的选择子子序列。

10.如权利要求7的试剂盒，其还包括能够掺入所述转录产物的经标 记的NTP。

11.如权利要求10的试剂盒，其中所述NTP是光学标记的。

12.如权利要求7的试剂盒，其中所述启动子为T7或T3或SP6启动 子子序列(模板链)。

13.如权利要求12的试剂盒，其还包括能够与所述T7、T3或SP6启 动子子序列形成双链体的非模板T7、T3或SP6启动子子序列。

14.如权利要求7的试剂盒，其还包括一组不同编码的微颗粒，所述 微颗粒适合结合不同类型的与所述转录产物互补的寡核苷酸。

15.如权利要求7的试剂盒，其还包括一组经标记的ddNTP或dNTP， 所述经标记的ddNTP或dNTP被设计用于在所述引物子序列延伸时掺入延 伸产物。

16.如权利要求7的试剂盒，其还包括半抗原标记的ddNTP或dNTP。

17.如权利要求16的试剂盒，其还包括磁性颗粒。

18.如权利要求7的试剂盒，其还包括能够与所述样品中子序列退火 的寡核苷酸，该寡核苷酸定位至引物的靶向子序列的3’端或定位至所述引 物。

19.如权利要求18的试剂盒，其中所述寡核苷酸是经标记的。

20.如权利要求18的试剂盒，其中所述寡核苷酸包括所述启动子子 序列。