[发明专利]诱导对抗原的粘膜耐受

说明书

本发明涉及诱导对抗原的耐受，这通过粘膜(优选经口)施用抗原与产生免疫调节化合物的微生物的组合来实现。更具体地，本发明涉及诱导产生Foxp3⁺和/或IL-10和/或TGF-β的抗原特异性调节性T细胞，其能够抑制不想要的针对抗原的免疫应答，所述诱导通过经口递送所述抗原与分泌免疫抑制细胞因子的微生物的组合来实现。

技术领域

免疫系统负有分辨自身和非自身的任务。沿呼吸道、胃肠道和泌尿生殖道存在的粘膜免疫系统还负有与多种细菌和无害抗原共存的责任，所述细菌和抗原为例如食物、空气传播的抗原或者共生菌群。粘膜免疫系统的关键特征是能够保持对这些抗原的耐受而同时保持有效抵御病原体的能力。全身性引入抗原(无论通过注射还是损伤)导致炎症细胞局部浸润以及特异性免疫球蛋白的产生。相反，在粘膜表面(例如胃肠道和泌尿生殖道)引入的抗原全身性引发对针对这些抗原的免疫应答的主动抑制。通过经胃肠道施用抗原来特异性诱导这些受调控的应答称为经口耐受。经口施用抗原可导致全身性不应答，这是对具有不理想副作用的免疫抑制医学发明(例如类固醇)的一种很有吸引力的替代方案。本发明特别涉及通过重复接触低剂量抗原而获得低剂量耐受的领域。已经提出将经粘膜进行的耐受诱导用作针对自身免疫病、变应性疾病和炎性疾病的治疗策略。

背景技术

尽管经口耐受首先描述于1911年，但是直到二十世纪70年代后期研究人员才开始阐明其涉及的机制(Mayer和Shao，2004a)。已经提出了用于开发经口耐受的一些机制，范围从抗特异性T细胞的清除、免疫偏离以及诱导对Treg抑制的无反应性(Mucida等，2005)。大多数研究人员赞同有两种不同的获得经口耐受的方式：单次抗原高剂量之后获得的高剂量耐受和通过重复接触低剂量抗原而获得的低剂量耐受，前者是基于无反应性和/或清除(Friedman和Weiner，1994)，后者由CD4⁺T细胞(包括生产Foxp3⁺、IL-10和/或TGF-β的调节性T细胞)免疫应答的主动抑制来介导。重要的是，已经显示粘膜耐受所诱导的调节性T细胞介导旁观者抑制(bystander suppression)，通过这一过程，对一种蛋白质具有特异性的调节性细胞抑制附近效应细胞对另一种蛋白质的应答。旁观者抑制是抗原诱导的抑制的重要特征，因为诱导器官特异性自身免疫的抗原库大部分是未知的，并且它避免了表位扩展(epitopespreading)现象。表位扩展是自身免疫和变应性疾病的并发症，由此最初的免疫应答随时间扩展到包括对其它抗原的应答。

通过显示Flt3L驱动DC扩增(Viney等，1998)和RANK-L介导的DC活化(Williamson等，2002)之后经口耐受增强的研究，人们已经间接提及了树突细胞在诱导经口耐受中的作用。具体地，未成熟树突细胞可介导耐受，据推测是通过诱导调节性T细胞。另外，IL-10可调节未成熟树突细胞的功能并抑制其终末分化，扩增参与诱导调节性T细胞的致耐受树突细胞的局部存在(De Smedt等，1997)。

粘膜耐受的诱导已在多种变态反应和自身免疫病实验模型中进行了评价，但是来自人类试验的临床数据普遍令人失望。已经进行了多种努力来递送与免疫调节化合物组合或不组合的抗原，以实现经口耐受，但是在大多数情况下效果不显著。在任何事件中，结果都不足以将所述方法转用到人类中。在所有这些实验中的主要问题在于，没有观察到通过诱导CD4⁺T细胞以及之后产生抗原特异性调节性T细胞所导致的主动抑制。只有当观察到上述情况，才可在人类中获得对抗原免疫应答的真实和主动的抑制。

靶向性且更高效地递送用于治疗和预防应用的分子是制药工业优先考虑的问题。有效的策略应通过将分子集中到期望的作用部位来降低所需剂量、提高安全性并改善疗效。相比于注射，药物和疫苗递送的粘膜途径提供了多种物流方面和生物学方面的优点。经口递送由于施用简单而特别具有吸引力。但是，胃肠降解以及低吸收水平通常使得这种肽和蛋白质药物递送途径无效。替代性粘膜途径(例如经鼻、直肠、肺和眼途径)也在研究中。粘膜递送蛋白质和肽疫苗抗原通常刺激弱免疫应答，并可诱导免疫耐受。