[发明专利]使用转化的酵母产生神经酰胺方法

权利要求书

1.在酵母细胞内产生人神经酰胺的方法，所述方法包括：

1)通过酵母细胞的转化，引入鞘氨基醇碱Δ4-去饱和酶基因(DES1)；及

2)通过酵母细胞的转化，使酵母二氢神经鞘氨醇C4-羟化酶基因(SUR2)的表达缺失。

2.权利要求1中所述的方法，其中，所述鞘氨基醇碱Δ4-去饱和酶基因(DES1)具有SEQ ID NO：2的氨基酸序列或具有在SEQ ID NO：2中缺失、附加或取代了1个或1个以上的氨基酸残基的氨基酸序列，且编码具有鞘氨基醇碱Δ4-去饱和酶活性的蛋白质。

3.权利要求1或2中所述的方法，其中，所述酵母二氢神经鞘氨醇C4-羟化酶基因(SUR2)具有SEQ ID NO：6的氨基酸序列或具有在SEQ ID NO：6中缺失、附加或取代了1个或1个以上的氨基酸残基的氨基酸序列，且编码具有二氢神经鞘氨醇C4-羟化酶活性的蛋白质。

4.权利要求1～3中任一项所述的方法，其还包括通过酵母细胞的转化，使酵母神经鞘脂类α-羟化酶基因(SCS7)的表达缺失。

5.权利要求1～4中任一项所述的方法，其中，所述酵母神经鞘脂类α-羟化酶基因具有SEQ ID NO：8的氨基酸序列或具有在SEQ ID NO：8中缺失、附加或取代了1个或1个以上的氨基酸残基的氨基酸序列，且编码具有神经鞘脂类α-羟化酶活性的蛋白质。

6.权利要求1～5中任一项所述的方法，其还包括通过酵母细胞的转化，使酵母碱性二氢神经酰胺酶基因(YDC1)的表达缺失。

7.权利要求1～6中任一项所述的方法，其中，所述酵母碱性二氢神经酰胺酶基因(YDC1)具有SEQ ID NO：10的氨基酸序列或具有在SEQ ID NO：10中缺失、附加或取代了1个或1个以上的氨基酸残基的氨基酸序列，且编码具有碱性二氢神经酰胺酶活性的蛋白质。

8.权利要求1～7中任一项所述的方法，其还包括通过酵母细胞的转化，使酵母的肌醇鞘氨醇磷脂磷脂酶C基因(ISC1)高表达。

9.权利要求1～8中任一项所述的方法，其中，所述酵母的肌醇鞘氨醇磷脂磷脂酶C基因(ISC1)具有SEQ ID NO：4的氨基酸序列或具有在SEQ ID NO：4中缺失、附加或取代了1个或1个以上的氨基酸残基的氨基酸序列，且编码具有肌醇鞘氨醇磷脂磷脂酶C活性的蛋白质。

10.在酵母细胞内产生人神经酰胺的方法，所述方法包括：

1)通过酵母细胞的转化，引入鞘氨基醇碱Δ4-去饱和酶基因(DES1)；

2)通过酵母细胞的转化，使酵母二氢神经鞘氨醇C4-羟化酶基因(SUR2)的表达缺失；

3)通过酵母细胞的转化，使酵母神经鞘脂类α-羟化酶基因(SCS7)的表达缺失；

4)通过酵母细胞的转化，使酵母碱性二氢神经酰胺酶基因(YDC1)的表达缺失；及

5)通过酵母细胞的转化，使酵母的肌醇鞘氨醇磷脂磷脂酶C基因(ISC1)高表达。

11.权利要求1～10中任一项所述的方法，其中，所述酵母选自酵母属中的酵母。