[发明专利]提高癌症早期MRI检测的肿瘤靶向纳米传送系统

说明书

                    发明背景 

发明领域

本发明属于药物传送，癌症治疗和诊断以及药物领域。本发明提供了制备抗体或抗体片段靶向免疫脂质体的方法，该免疫脂质体用于全身传送治疗疾病和使疾病成像的分子，疾病包括癌性肿瘤。本发明还提供了免疫脂质体和组合物，以及使各种组织成像的方法。脂质体复合物用于成像剂的包裹，例如，用于磁共振成像。传送系统的特异性源自靶向抗体或抗体片段。 

发明背景 

对于结束由疾病引起的疼痛和苦难的目标而言，在早期检测原发性和转移性癌症的能力将是主要的步骤。用于基因治疗的肿瘤靶向传送系统的研发已经展现了比目前可用的方法更有效地传送成像剂的可能。磁共振成像(MRI)可以获取器官的3-维解剖图像。将这些结合顺磁性图像导致肿瘤的精确定位以及肿瘤生长和血管生成的纵向和定量的监控(Gillies，R.J.等，Neoplasia 2：139-451(2000)；Degani，H.等，Thrombosis & Haemostasis 89：25-33))。 

癌症诊断中最常用的顺磁性成像剂之一是Magnevist (钆喷葡胺)(Mag)(Berlex Imaging，Montville，NJ)。钆是稀有土族元素。由于其离子(Gd⁺⁺)具有七个未配对的电子，其显示出顺磁性的特征。MRI扫描中观察到的造影增强主要是由于Gd⁺⁺对氢质子自旋点阵张弛时间的强烈影响而引起的。尽管游离的钆是高度毒性的，并因此不适于临床使用，但与二乙撑三胺五乙酸(DTPA)的螯合产生了良好耐受性的，稳定的，强烈顺磁性的复合物。这种金属螯合物在代谢上是惰性的。然而，静脉注射钆喷葡胺后，葡甲胺离子与疏水性钆喷酸盐 (gadopentetate)分离，其只分布在胞外水中。它不能够穿过完整的血脑屏障，并因此不在正常的脑组织，包囊，术后伤疤等中累积，并在尿液中快速排出。它具有约1.6小时的平均半衰期。大约80％的剂量在6小时内在尿液中排出。 

然而，使用现有的造影剂存在显著的局限性，包括它们主要是基于灌注和扩散标记以及葡萄糖摄入。使用这些游离的(非复合的)试剂，在肿瘤，炎症疾病中看到变化，甚至具有激素影响(在乳腺中)(例如，最常见的基于钆和基于碘的造影剂证明了灌注并扩散至胞间隙中，PDG-PET证明了葡萄糖摄入)。因此，这些造影剂没有特异性地靶向肿瘤。此外，活动的良性过程通常不能与恶性的区分开来，例如，乳腺MRI上的良性增强区域，慢性胰腺炎对胰腺癌。还存在小肿瘤不能充分摄入这些试剂，并因此灵敏度差和缺乏早期检测，这在如肺癌这样的疾病中是特别关键的。它还不可能检测出孤立性肺结节或胸膜结节。因此，需要用于将这样的试剂传送至体内的特定组织，例如，传送至肿瘤组织和转移瘤的机制。 

                    发明简述 

在一个实施方案中，本发明提供了制备抗体或抗体片段靶向阳离子免疫脂质体复合物的方法，其包括制备抗体或抗体片段，将抗体或抗体片段与阳离子脂质体混合来形成阳离子免疫脂质体，其中抗体或抗体片段没有在化学上缀合阳离子脂质体，并将阳离子免疫脂质体与成像剂混合来形成抗体或抗体片段靶向阳离子免疫脂质体复合物。用于本发明实践中的示例抗体片段包括单链Fv片段，如抗转铁蛋白受体单链Fv(TfRscFv)和抗HER-2抗体或抗体片段。在其他的实施方案中，该方法进一步包括将阳离子免疫脂质体与包括K[K(H)KKK]5-K(H)KKC(HoKC)(SEQ ID NO：1)肽的肽混合。 

合适地，以约1∶20至约1∶40(w∶w)的比例将抗体或抗体片段与所述阳离子脂质体混合。合适地，阳离子脂质体包括二油酰三甲磷酸铵与二油酰磷脂酰乙醇胺和/或胆固醇的混合物；或二甲基二(十八烷基)溴化铵与二油酰磷脂酰乙醇胺和/或胆固醇的混合物。 

在其他的实施方案中，以约1∶10至约1∶35的比例(mg成像剂∶μg脂质体)，合适地约1∶14至约1∶28(mg成像剂∶μg脂质体)，或约1∶21(mg成像剂∶μg脂质体)将阳离子免疫脂质体与成像剂混合。用于本发明实践中的示例成像剂包括，但不限于，磁共振成像(MRI)剂，如钆，钆喷葡胺，碘帕醇和氧化铁。此外，还可以使用用于CT的钡，碘和盐水成像剂，用于PET的¹⁸F-2-脱氧-2-氟代-D-葡萄糖(FDG)和其他成像剂。