[发明专利]用于癌患者免疫治疗的瘤反应性T－淋巴细胞扩增的改善方法

权利要求书

1.用于扩增瘤反应性CD4+ T辅助细胞和/或CD8+ T-淋巴细胞的体外方法，该方法包括：

i) 使用瘤由来抗原和IL-2刺激瘤反应性CD4+T-辅助细胞和/或CD8+ T-淋巴细胞以促进瘤反应性CD4+T-辅助细胞和/或CD8+ T-淋巴细胞存活的第一阶段；和 

ii) 激活和促进瘤反应性CD4+T辅助细胞和/或CD8+T-淋巴细胞生长的第二阶段，其中第二阶段ii)当CD4+ T辅助细胞和/或CD8+ T-淋巴细胞上的CD25细胞表面标记物下调时被启动，其中下调被定义为5%或更低的T-淋巴细胞群表达CD25，并且其中阶段ii)通过向T淋巴细胞添加用于激活瘤反应性CD25-阴性T淋巴细胞的瘤由来抗原被启动。

2.权利要求1的方法，其中第一阶段i)通过添加IL-2被启动。

3.权利要求1或2的方法，其中瘤由来抗原是经变性的瘤匀浆。

4. 权利要求1或2的方法，其中的瘤由来抗原是纯的蛋白质、多肽或肽形式的瘤由来抗原。

5.权利要求1或2的方法，其还包括向T-淋巴细胞添加抗原递呈细胞连同瘤由来抗原。

6. 权利要求3的方法，其中瘤由来抗原是自身抗原。

7. 权利要求5的方法，其中抗原递呈细胞是经照射的包含抗原递呈B细胞和/或单核细胞的周围血液白细胞。

8. 权利要求1或2的方法，其中第二阶段ii)包括添加至少一种能够上调T-淋巴细胞上的IL-12R的物质。

9. 权利要求1或2的方法，其中第二阶段ii)包括添加一种或多种能够对抗Th2型T-淋巴细胞的发展的物质。

10. 权利要求9的方法，其中一种或多种能够对抗Th2型T-淋巴细胞的发展的物质是一种或多种能够中和IL-4、IL-5、IL-10和/或TGF- β的物质。

11. 权利要求10的方法，其中一种或多种能够中和IL-4、IL-5、IL-10和/或TGF-β的物质是抗IL-4抗体、抗IL-5抗体和/或抗IL-10抗体，以及TGF- β的可溶受体和TGF-β的结合蛋白。

12. 权利要求1或2的方法，其中另外量的一种或多种能够对抗Th2型T-淋巴细胞的发展的物质在整个阶段ii)中有规律地被添加。

13. 权利要求12的方法，其中一种或多种能够对抗Th2型T-淋巴细胞的发展的物质选自一种或多种能够中和IL-4、IL-5、IL-10和/或TGF- β的物质。

14. 权利要求1或2的方法，其中第二阶段ii)包括添加一种或多种促进Th1型T-淋巴细胞的发展的物质。

15. 权利要求14的方法，其中一种或多种促进Th1型T-淋巴细胞的发展的物质是具有针对IL-7、IL-12、IL-15和/或IL-21受体的激动活性的物质。

16. 权利要求15的方法，其中一种或多种物质选自IL-7、IL-12、IL-15和IL-21。

17. 权利要求1或2的方法，用于制备记忆型和/或效应器型的Th1-淋巴细胞。

18. 权利要求1或2的方法，其另外包括在第一阶段i)和第二阶段ii)期间连续地监控T-淋巴细胞上的细胞表面标记物CD25和/或CD69的表达，并且其中T-淋巴细胞当在第二阶段ii)中T-淋巴细胞上的CD25下调时被收获。

19. 权利要求18的方法，其中当T-淋巴细胞上的CD25下调时T-淋巴细胞经历至少一个另外回合的阶段ii)。

20. 权利要求1或2的方法，其中T-淋巴细胞来自引流原发瘤和/或转移瘤的淋巴结，或者T-淋巴细胞来自血液。