[发明专利]用于癌患者免疫治疗的瘤反应性T－淋巴细胞扩增的改善方法

说明书

技术领域

本发明涉及用于瘤反应性淋巴细胞特别是CD4+辅助细胞和/或 CD8+T-淋巴细胞的扩增和激活的改善方法。T-淋巴细胞不是CD4+ CD25^+Hi淋巴细胞，即，本发明不包括调节T-淋巴细胞。淋巴细胞可用 于治疗和/或预防癌。

背景技术

根据免疫监视假说，免疫系统持续敏化以对抗发展瘤，其中实验 证据有力地支持这一概念。鉴定特异性瘤抗原提供了用于瘤免疫治疗 的新的可能性，并且许多免疫治疗方法目前已转入临床试验。其中， 瘤抗原特异性淋巴细胞的过继转移似乎特别有前途。迄今为止，这些 努力通常基于得自周围血液的单核细胞或与新鲜瘤样品分离的瘤浸润 淋巴细胞(TIL)。在新近的试验中，已经报告了用扩增的TIL的自身转 移治疗恶性黑色素瘤患者，目标应答率高达51％。TIL细胞数量较少， 由于从扩增到存在(数月)瘤生成的长期免疫抑制机制它们通常无应答 性(无反应性)。另外，方案已经针对CD8+细胞毒性T细胞的扩增，并 且已将该细胞再引入到用化学治疗进行预处理的患者内，并且另外， 患者已经用高剂量的白细胞介素-2处理以提供CD8+T细胞的存活。

发明公开

本发明人先前已经表明原初T细胞的激活可存在于metinel淋巴器 官如前哨淋巴结的高度特异性环境内。换句话说，前哨淋巴结被认为 是免疫系统遭遇瘤抗原的主要部位。

本发明人先前已经公开了用于扩增得自前哨淋巴结的瘤反应性T- 淋巴细胞的一般方法，表明有可能培养从得自前哨淋巴结的淋巴细胞， 以获得瘤反应性T-淋巴细胞的培养物。通过对除去前哨淋巴结的患者 给用有效量的瘤反应性T-淋巴细胞，瘤反应性T-淋巴细胞可用于治疗 癌。

包括给用瘤反应性T-淋巴细胞的癌治疗的成功性通过测定以下因 素确定，诸如，例如，在扩增步骤后获得的瘤反应性T-淋巴细胞的量， 即，可用于输注至患者的瘤反应性T-淋巴细胞的量，获得有效量的瘤 反应性T-淋巴细胞所需的时间，以及通过扩增方法获得的瘤反应性T- 淋巴细胞的特定亚群的浓度和比。

因此，本发明公开了用于扩增瘤反应性CD4+辅助细胞和/或CD8+ T-淋巴细胞的改善方法，其中特异性培养条件已经过确定和优化，并且 其中在整个扩增期内监控T-淋巴细胞上的和培养物内的特异性标记 物，以在最短的可能时间跨度内获得大量的瘤反应性T-淋巴细胞。另 外，本发明同时提供了用于引导瘤反应性CD4+辅助细胞和/或CD8+T- 淋巴细胞向特定亚群发展的方法。T-淋巴细胞不是CD4+CD25^+Hi淋巴 细胞，即，本发明不包括调节T-淋巴细胞。

表达转录因子FoxP3的CD4⁺CD25^HiT淋巴细胞被认为是调节T 细胞(Treg)。Treg通过抑制激活和增殖而具有调节T辅助细胞和T细胞 毒性细胞的性质，并且，另外，Treg抑制有用的Th1细胞因子例如IFN-γ 的产生和释放。因此，开发了本发明提供的方法，以促进T辅助细胞 和T细胞毒性T细胞扩增并避免Treg细胞扩增。

最通常由本发明产生的瘤反应性T-淋巴细胞是CD4+辅助细胞T- 淋巴细胞。本发明扩增方法的一个目的是在一些方面模拟患者自身免 疫系统的天然路径，并且在一定程度上让患者免疫系统的组分确定是 否首先生成CD4+辅助细胞或CD8+T-淋巴细胞，这根据抗原是否由 MCHI或MCHI递呈而定。在大多数场合下，抗原由MCHII分子递呈， 导致生成CD4+辅助细胞T-淋巴细胞，然而，有时候，生成CD8+T- 淋巴细胞。如果生成CD4+辅助细胞T-淋巴细胞，它们将进一步如本文 所述被扩增，然而，该方法还可用于扩增CD8+细胞。本发明人已经发 现包括两个不同阶段的扩增方法可特别地用于在较短时间跨度内获得 大量的瘤反应性CD4+辅助细胞和/或CD8+T-淋巴细胞，所述两个阶段 是：

i)使用瘤由来抗原和至少一种具有针对IL-2受体的激动活性的物 质刺激瘤反应性T-淋巴细胞以促进瘤反应性T-淋巴细胞存活的第一阶 段，和

ii)激活和促进瘤反应性T-淋巴细胞生长的第二阶段，其中第二阶 段ii)当T-淋巴细胞上的CD25细胞表面标记物(IL-2R标记物)下调时被 启动。