[发明专利]针对抑制VIII因子的抗体的细胞毒性抗体

说明书

技术领域

本发明涉及针对抑制人VIII因子的抗体的抗独特型抗体，所述抑制 性抗体靶向人VIII因子的C2区，所述抗体的每条轻链的可变区的核苷 酸编码序列与鼠科动物的核苷酸序列SEQ ID NO：1具有至少70％的一致 性，所述抗体的每条重链的可变区的核苷酸编码序列与鼠科动物的核苷 酸序列SEQ ID NO：2具有至少70％的一致性，所述抗体的轻链恒定区和 重链恒定区来源于非鼠科种的恒定区，本发明还涉及所述抗体在激活细 胞毒免疫细胞的FcγRIII受体，以及生产药物，特别是用于治疗血友病的 药物中的应用。

背景技术

A型血友病是与X染色体异常连锁的遗传性疾病，其导致受损伤之 处血液不能凝集。A型血友病是最常见的影响血液凝集的缺陷症；在法 国，每5000人中就有1人罹患，其占血友病病人的80％。该病是有关凝 集的蛋白，因子VIII(FVIII)的基因变异所致，其既可以由于血液中完 全缺乏FVIII，也可以是FVIII的部分缺陷。

血友病病人的20％罹患血友病的另一类型，血友病B；其由另一凝 血因子，IX因子的缺陷引起。

当前的血友病治疗(A型或B型)包括以静脉途径给药缺陷或缺失 的凝血因子。在法国，意在治疗A型血友病病人的FVIII可以以来源于 血液的药物的形式获得，所述血液由法国血液分割暨生化制品实验室 (Laboratoire Francais du Fractionnement et des Biotechnologies)(LFB)或国 际药物实验室供应，还可以以来自于基因工程的重组药物的形式获得。 事实上，已分离到编码FVIII的DNA，并已在哺乳动物细胞中表达(Wood 等人，Nature(1984)312：330-337)，并且已根据cDNA推断出其氨基酸序 列。

分泌出的FVIII是分子量为300Kda(2332个氨基酸)的糖蛋白，其 在内源性凝血通路中扮演重要的角色。无活性的FVIII由六个结构域组 成：从N末端到C末端为，A1(1-372残基)、A2(373-740残基)、B(741-1648 残基)、A3(1690-2019残基)、C1(2020-2172残基)和C2(2173-2332 残基)。分泌后，FVIII与温韦伯氏因子(von Willebrand factor，vWF)相 互作用，vWF保护FVIII不受血浆蛋白酶作用。经凝血酶切割后，FVIII 从vWF上解离。切割使B区被排除，并形成异源二聚体。FVIII以该形 式在血浆中循环。该异源二聚体由一重链(A1、A2)和一轻链(A3、C1、 C2)组成。

当将FVIII灌输入血友病患者体内时，其与患者血液循环中的vWF 结合。激活的FVIII作为激活的IX因子的辅助因子起作用，IX因子加速 X因子到活性X因子的转换。激活的X因子使凝血酶原转换成凝血酶。 之后凝血酶使纤维蛋白原转换成纤维蛋白，并出现凝集。

在给药FVIII中出现的主要问题是在患者体内出现抗FVIII的抗体， 其被称为“抑制性抗体”。这些抗体中和FVIII的促凝活性，导致当抗体一 经灌注，FVIII就被灭活。因此，在能够抑制出血之前，所应用的凝血因 子就被破坏，其中出血导致了一系列的血友病并发症，使治疗失去了效 力。而且，某些非遗传性血友病患者可以产生抗内源性FVIII的抑制剂： 其为获得性的血友病。

研究显示，抗FVIII免疫应答是多克隆的，主要针对A2和C2结构 域(Gilles JG等(1993)Blood；82：2452-2461)。为研究FVIII抑制剂的形 成，建立了动物模型；用重组人FVIII免疫的大鼠显示出快速的多克隆型 的免疫应答(Jarvis等Thromb Haemost.1996Feb；75(2)：318-25)。

抗FVIII的抑制性抗体干扰FVIII功能的机制有许多，包括干扰FVIII 的蛋白裂解，及干扰FVIII与不同伴侣如vWF、磷脂(PL)、IX因子、 活性X因子(FXa)或APC(活化蛋白C)的相互作用。