[发明专利]利用pmi基因快速获得转基因甘蔗的方法无效
申请号: | 200710008719.X | 申请日: | 2007-03-19 |
公开(公告)号: | CN101270353A | 公开(公告)日: | 2008-09-24 |
发明(设计)人: | 张木清;吴杨;陈如凯;卓晓蕾 | 申请(专利权)人: | 福建农林大学 |
主分类号: | C12N15/09 | 分类号: | C12N15/09;C12N5/04;C12N15/82;C12N15/87;C12Q1/04 |
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地址: | 350002福建*** | 国省代码: | 福建;35 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 利用 pmi 基因 快速 获得 转基因 甘蔗 方法 | ||
1. 一种利用pmi基因快速获得转基因甘蔗的方法,其特征在于包括以下步骤:(1)抗性植株的获得:切取经消毒处理后直径为0.4~0.8cm,厚为1~2mm的甘蔗新叶,接种于诱导培养基上,于暗室中培养,培养温度为25±1℃,每15d继代一次;选择生长良好的甘蔗胚性愈伤组织作为转基因受体,将构建好的含pmi基因的植物表达载体pUP,利用基因枪转导或农杆菌介导法转化甘蔗细胞;
将基因枪轰击后的胚性愈伤组织放入高渗培养基中10~20小时后转入继代培养基中培养2~10天,后转入总碳源为10g的含甘露糖继代培养基中进行筛选,26~28℃黑暗培养10~20天;之后将生长良好的愈伤组织转接到分化培养基中进行分化6~8周,培养12 h·d-1,光照度1000~2000Lux,培养温度为26~28℃;待苗长至6~8cm时转接到生根培养基中促根培养,获得抗性植株;
(2)转基因植株的快速检测:采用氯酚红(chlorophenol red,CPR)法,将待测组织接种到含有甘露糖和氯酚红的MS液体培养基中,在黑暗条件下,20~35℃培养1~5d后,观察培养基颜色变化,培养基颜色变成黄色或橙色,则pmi基因已成功导入。
2. 根据权利要求1所述的一种利用pmi基因快速获得转基因甘蔗的方法,其特征在于步骤(1)所述的消毒处理,选取生长旺盛的甘蔗梢部30cm,去其叶片及顶端5cm,用70%酒精表面消毒2~3min后,超净工作台上剥去其最外层,再用70%酒精表面消毒1~2min后剥去次外层,然后切取新叶,接种于诱导培养基上。
3. 根据权利要求1所述的一种利用pmi基因快速获得转基因甘蔗的方法,其特征在于步骤(1)所述含甘露糖继代培养基,即在继代培养基中加入甘露糖和蔗糖,甘露糖取值范围为2g·L-1~8g·L-1,蔗糖取值范围为8g·L-1~2g·L-1,甘露糖与蔗糖总和为10g·L-1。
4. 根据权利要求1所述的一种利用pmi基因快速获得转基因甘蔗的方法,其特征在于步骤(2)所述的含有甘露糖和氯酚红的MS液体培养基中,甘露糖含量为2~5g·L-1、氯酚红含量为30~60mg·L-1。
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