[发明专利]利用pmi基因快速获得转基因甘蔗的方法

权利要求书

1. 一种利用pmi基因快速获得转基因甘蔗的方法，其特征在于包括以下步骤：(1)抗性植株的获得：切取经消毒处理后直径为0.4～0.8cm，厚为1～2mm的甘蔗新叶，接种于诱导培养基上，于暗室中培养，培养温度为25±1℃，每15d继代一次；选择生长良好的甘蔗胚性愈伤组织作为转基因受体，将构建好的含pmi基因的植物表达载体pUP，利用基因枪转导或农杆菌介导法转化甘蔗细胞；

将基因枪轰击后的胚性愈伤组织放入高渗培养基中10～20小时后转入继代培养基中培养2～10天，后转入总碳源为10g的含甘露糖继代培养基中进行筛选，26～28℃黑暗培养10～20天；之后将生长良好的愈伤组织转接到分化培养基中进行分化6～8周，培养12 h·d^-1，光照度1000～2000Lux，培养温度为26～28℃；待苗长至6～8cm时转接到生根培养基中促根培养，获得抗性植株；

(2)转基因植株的快速检测：采用氯酚红(chlorophenol red，CPR)法，将待测组织接种到含有甘露糖和氯酚红的MS液体培养基中，在黑暗条件下，20～35℃培养1～5d后，观察培养基颜色变化，培养基颜色变成黄色或橙色，则pmi基因已成功导入。

2. 根据权利要求1所述的一种利用pmi基因快速获得转基因甘蔗的方法，其特征在于步骤(1)所述的消毒处理，选取生长旺盛的甘蔗梢部30cm，去其叶片及顶端5cm，用70％酒精表面消毒2～3min后，超净工作台上剥去其最外层，再用70％酒精表面消毒1～2min后剥去次外层，然后切取新叶，接种于诱导培养基上。

3. 根据权利要求1所述的一种利用pmi基因快速获得转基因甘蔗的方法，其特征在于步骤(1)所述含甘露糖继代培养基，即在继代培养基中加入甘露糖和蔗糖，甘露糖取值范围为2g·L^-1～8g·L^-1，蔗糖取值范围为8g·L^-1～2g·L^-1，甘露糖与蔗糖总和为10g·L^-1。

4. 根据权利要求1所述的一种利用pmi基因快速获得转基因甘蔗的方法，其特征在于步骤(2)所述的含有甘露糖和氯酚红的MS液体培养基中，甘露糖含量为2～5g·L^-1、氯酚红含量为30～60mg·L^-1。