[发明专利]一种以翡翠贻贝粘附蛋白制备生物粘合剂的方法

权利要求书

1.一种以翡翠贻贝粘附蛋白制备生物粘合剂的方法，其特征在于所述的以翡翠贻贝粘附蛋白制备生物粘合剂的过程如下：

1)取活的翡翠贻贝足部，用-5～0℃的PBS冲洗后，在-5～0℃的含蛋白酶抑制剂的5％醋酸溶液中切碎；

2)用分散机/均质器将上述切碎混合液在冰上匀浆；

3)将组织匀浆液离心，取上清S1，记录体积V1，弃沉淀；

4)将上清S1冰浴，同时缓慢加入60％高氯酸(PCA)至终浓度1％；

5)温和搅拌20～40min后离心，回收上清S2，记录体积V2；

6)将上清S2在-10～-20℃的冰乙醇中冷却，并在搅拌时加入浓硫酸酸化，至终浓度0.3M；

7)向混合液中逐滴加入两倍体积的预冷的-82～-86℃丙酮；

8)静置20～30min后离心，弃上清，取沉淀溶于5％乙酸中，再离心，取上清液，冻干；

9)用5％冰醋酸溶液重新溶解冻干产物，离心去沉淀，将上清浓度调整到蛋白浓度为1.44mg/ml，即得到一种以翡翠贻贝粘附蛋白制备生物粘合剂。

2.如权利要求1所述的一种以翡翠贻贝粘附蛋白制备生物粘合剂的方法，其特征在于所述的蛋白酶抑制剂为胃酶抑素A、亮肽酶素或苯甲基磺酸氟。