[发明专利]一种检测土壤中铵氧化酶活性的分析方法

权利要求书

1.一种检测土壤中铵氧化酶活性的分析方法，其特征在于：

1)称取5-10g新鲜土样品n份分别置入n个三角瓶中，n≥2，向其中n-1个三角瓶中加入5-15mL 1-10mM的底物硫酸铵工作液，另1支试管中加入等量的蒸馏水代替底物作为样本对照，然后向所有三角瓶中加入0.2-0.5mL 1.0-2.0M的氯酸钠溶液(试验中加入的氯酸钠溶液是用来抑制亚硝态氮到硝态氮的氧化)，混匀，盖好瓶塞，放在37±1℃恒温培养中恒温培养2±0.2h；同时作试剂空白对照；

2)培养结束后，分别向三角瓶中加入5-20mL 1.8-2moLKCL溶液，混匀，振荡1±0.5h后，过滤；

3)分别吸取5-10ml滤液于比色试管中，加入3-5ml 0.19-0.2M氯化铵缓冲溶液和2-5ml显色剂，混匀，显色15±5min；

4)用分光光度法520nm处测定吸光度A；

5)制作工作标准曲线：配制一系列亚硝态氮标准溶液，分别吸取一系列的标准溶液5-10ml于不同比色试管中，分别加入3-5ml 0.19-0.2M氯化铵缓冲溶液和2-5ml显色剂，混匀，显色15±5min，与样品一起在520nm测定吸光度A’；以亚硝态氮溶液的系列浓度和测定的吸光值A’制作工作标准曲线，得到斜率b；

6)根据吸光值A和斜率b，计算所测定滤液中亚硝态氮的浓度S，S＝A*b；

7)计算样品中亚硝态氮含量；

8)计算铵氧化酶活性：

计算公式为：(S-C)*V₁*V₂/(V₃.W)＝μg NO₂-N/g干土.2h

式中：S为样品测定的平均值(mg NO₂-N/L)；C为对照值(mgNO₂-N/L)；V₁为比色试管中的液体体积(mL)；V₂为提取液的体积(mL)；V₃为吸取的滤液体积(mL)；W为干土质量(g)。

2.根据权利要求1所述的分析方法，其特征在于：所述制作工作标准曲线过程为，吸取1000mg NO₂-N/L的亚硝态氮标准贮备液5mL，定容到500mL，此为10mg NO₂-N/L的溶液；再分别吸取该液0，2，4，8，10mL于100mL容量瓶中，加入5-15mL 1.8-2M KCI溶液后，用蒸馏水定容，如有沉淀过滤；此标准系列含亚硝态氮的量分别为0，0.2，0.4，0.8和1.0mgNO₂-N/L；分别吸取一系列的标准溶液5-10ml于不同比色试管中，加入3-5ml0.19-0.2M氯化铵缓冲溶液和2-5ml显色剂，混匀，显色15±5min，与样品一起在520nm测定吸光度A’；以亚硝态氮溶液的系列浓度和测定的吸光值A’制作工作标准曲线，得到斜率b。

3.根据权利要求1所述的分析方法，其特征在于：所述实验所使用的蒸馏水，使用前，需将其加热至沸腾驱除水中的O₂，然后封闭冷却至室温。

4.根据权利要求1所述的分析方法，其特征在于：显色剂磺胺和N-(1-奈基)-乙二胺盐酸溶液必须为无色且是当天配制的，而它们的加入相对于亚硝酸根为过量的。