[发明专利]酶法水解黄芪皂苷糖基制备黄芪甲苷的方法

说明书

技术领域：

本发明涉及一种制备低糖基黄芪皂苷的方法，尤其是一种用能水解黄芪皂苷糖基的酶处理黄芪皂苷糖基，以提高黄芪甲苷含量的酶法水解黄芪皂苷糖基制备黄芪甲苷的方法。

背景技术：

黄芪是常用中药之一，具有提高人体免疫力、补气、降压、强心、消炎去肿、抗病毒等功效。目前我国药用的主要品种是蒙古黄芪(Astragalusmembranaceus[Fisch.]Bge var.mongholicus)和膜荚黄芪(Astragalusmembranaceus[Fisch.]Bge[Phaca membranacea Fisch.]。黄芪中的主要有效成分为黄芪皂苷(新鲜黄芪根中皂苷糖基上往往带有乙酰基，但在加工生晒过程中将乙酰基去掉，但是黄芪中含量高的皂苷十三根和四个糖基的皂苷，药效显著的恋歌糖基的黄芪甲苷含量却低《余瑛、杨胜华：华西药学杂志，8(3)，165-166，1993》)。黄芪甲苷其学名为3-O-(β-D-木糖基)，6-O-β-D-葡萄糖基黄芪苷元，其化学分子结构为：

黄芪皂苷中大多是三个和四个糖基的皂苷：即在黄芪甲苷3-O-Xyl(木糖基)上结合葡萄糖基(Glc)或者鼠李糖基(Rha)，成为双糖3-O-Xyl-Glc或3-O-Xyl-Rha，其化学分子结构为：

或者在黄芪甲苷3-O-Xyl(木糖基)结合葡萄糖基(Glc)或者鼠礼糖基(Rha)，或者第25碳的羟基上届和葡萄糖基(Glc)等，其化学分子结构如下：

本发明用酶法水解黄芪中含量高的三个和四个糖基的黄芪皂苷的部分糖基，转化成药效高的黄芪甲苷，可制备高含黄芪甲苷的黄芪制品(黄芪片或者粉末)、高含黄芪甲苷的总皂苷，或者由此提高黄芪甲苷的提取率。

发明内容：

本发明是为了解决现有技术中所存在黄芪甲苷含量低的技术问题，提供一种酶法水解黄芪中含量高的皂苷糖基(含三个和四个糖基)，制备黄芪甲苷的方法，无污染、目的性强、转化率高。

本发明的技术解决方案是：一种酶法水解黄芪中含量高的三个和四个糖基的皂苷，转化成含两个糖基的黄芪甲苷的方法，其特征在于：用酶水解黄芪皂苷糖基转化成黄芪甲苷。

所述的酶是以黄芪皂苷或黄酮或异黄酮为发酵产酶诱导物，由细菌、链霉所述的酶是以黄芪皂苷或黄酮或异黄酮为发酵产酶诱导物，产出能水解黄芪皂苷糖基的酶，并大大提高其产酶量。该酶由细菌、链霉菌、霉菌、酵母菌、担子菌发酵方法制备；发酵方法可用液态发酵法或固态发酵法。固态发酵产酶之后，用醋酸缓冲液、磷酸缓冲液、Tris缓冲液等常规缓冲液提取酶，即成发酵酶液；液体发酵产酶、除菌除杂、即成发酵酶液；将其发酵酶液中加入硫酸铵或者乙醇沉淀酶蛋白，收集沉淀，用1/10体积的缓冲液溶解沉淀，除杂，即得浓缩的粗酶液；该粗酶液经酶蛋白分离中常用的离子交换树脂柱，色谱主或者电泳方法分离得到经黄芪皂苷转化为黄芪甲苷的纯酶。

上述酶处理黄芪总皂苷，使3个和4个糖基的黄芪皂苷转化成黄芪甲苷而提高黄芪总皂苷中的黄芪甲苷的含量4～6倍以上；上述酶液处理黄芪、黄芪片、黄芪粉末，提高黄芪中的黄芪甲苷含量4～6倍以上的黄芪制品；由此从酶处理的黄芪、黄芪总皂苷中分离提取黄芪皂苷，提高黄芪甲苷的提取率。其酶的反应温度为4～60℃，PH值为3～10，反应时间为4～40小时。

本发明同现有技术相比，最大的特点是在细菌、链霉菌、霉菌、酵母菌、担子菌等微生物发酵中加入了黄芪皂苷或黄酮或异黄酮等产酶诱导物，大大提高能水解黄芪皂苷糖基酶的产量。用产出的酶(粗制酶或纯化酶)处理黄芪，使3个和4个糖基的黄芪皂苷转化成黄芪甲苷而提高了黄芪甲苷的含量，可制备黄芪甲苷含量高的黄芪片、粉末等其他制品。用产出的酶(粗制酶或纯化酶)处理黄芪总皂苷，使3个和4个糖基的黄芪皂苷转化成黄芪甲苷，而提高黄芪总皂苷中的黄芪甲苷的含量，由此提高了黄芪甲苷的提取率；克服了酸碱法处理糖基所存在的对皂甙破坏性大、污染严重、目的性差等缺点，具有无污染、目的性强、转化率高的优点。

具体实施方式：

实施例1：