[发明专利]一种基于移动切割内切酶的DNA结合蛋白检测方法

权利要求书

1.一种基于移动切割内切酶的DNA结合蛋白检测方法，其特征为：双链寡核苷酸探针的设计：针对待检测的DNA结合蛋白的特异性DNA识别位点的序列信息设计一段双链寡核苷酸探针，其中一条单链5’端标记一个连接基团(1)并固定到固相载体(2)表面，另一条与之互补的单链的5’端引入一个信号分子(6)；同时在含有待测DNA结合蛋白的识别位点(3)的3’端设计一个特异的IIS型限制性内切酶识别位点(5)，调节限制性内切酶与待检测DNA结合蛋白识别位点(3)间的碱基个数，使移动切割限制性内切酶的切割位点(4)位于待检测DNA结合蛋白结合位点(3)之中；其检测方法为：将可能含有待检测的DNA结合蛋白的溶液与固定化的上述双链寡核苷酸探针一起孵育，清洗未结合的溶液后将该固定化的双链寡核苷酸探针在限制性内切酶体系中进行酶切反应，最后检测固相载体表面残留的信号分子的强度实现间接检测溶液中含有的待检测的DNA结合蛋白的量。

2.根据权利要求1所述的一种基于移动切割内切酶的DNA结合蛋白检测方法，其特征为：待检测的DNA结合蛋白的特异性DNA识别位点的序列信息是指每一个DNA结合蛋白都能特异性地识别一段DNA碱基序列并能够结合到该序列位置上，不同的DNA结合蛋白其识别并结合的DNA碱基序列也不一样。

3.根据权利要求1所述的一种基于移动切割内切酶的DNA结合蛋白检测方法，其特征为：移动切割限制性内切酶是指一类IIS型限制性内切酶，其针对双链DNA的切割位点和特异性的识别位点不在同一位置上，而一般相差5～15个碱基。

4.根据权利要求1所述的一种基于移动切割内切酶的DNA结合蛋白检测方法，其特征为：使限制性内切酶的切割位点(4)位于待检测DNA结合蛋白结合位点(3)之中，是指根据所选择的限制性内切酶的识别位点和切割位点的信息，在双链探针上调节内切酶识别位点序列的位置，使该酶的切割位置正好位于DNA结合蛋白的结合位点之中。

5.根据权利要求1所述的一种基于移动切割内切酶的DNA结合蛋白检测方法，其特征为：可能含有待检测的DNA结合蛋白的溶液是指细胞的核提取物或蛋白质的表达产物或溶解有该DNA结合蛋白的缓冲液。

6.根据权利要求1所述的一种基于移动切割内切酶的DNA结合蛋白检测方法，其特征为：说所述固相载体是指经过物理或化学修饰后能够共价耦合或者物理吸附生物分子的具有较大表面积的固体物质。

7.根据权利要求1所述的一种基于移动切割内切酶的DNA结合蛋白检测方法，其特征为：“探针上引入的信号分子”是指可以通过光、电、磁检测到的分子基团。

8.根据权利要求1所述的一种基于移动切割内切酶的DNA结合蛋白检测方法，其特征为：“检测固相载体表面残留的信号分子的强度实现间接检测溶液中含有的待检测的DNA结合蛋白的量”是指当待检测的DNA结合蛋白存在并结合到固定化的双链寡核苷酸探针时，由于空间位阻作用，限制性内切酶无法将结合有蛋白质的双链寡核苷酸探针切断，经过冲洗后信号分子仍然保留在固相载体表面，而没有待检测的DNA结合蛋白结合时，双链寡核苷酸探针便会在空闲的DNA结合蛋白结合位点中被限制性内切酶切断，经过冲洗后信号分子无法保留在固相载体表面，固相载体表面保留下来的信号分子数理论上与结合上的DNA结合蛋白的量成正相关，根据固相载体表面残留的信号分子的信号强弱实现对DNA结合蛋白的非标记检测。