[发明专利]一种溶癌病毒及其制备方法

权利要求书

1.一种溶癌病毒，其组成的主要成分包括肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体TRAIL、人端粒酶逆转录酶启动子hTERT、腺病毒载体Ad和巨细胞病毒CMV-E。

2.如权利要求1所述的溶癌病毒，其特征在于，它的构建形式为：

3.一种制备权利要求1所述的溶癌病毒的方法，包括如下步骤：

(1)TRAIL基因的扩增、克隆和测序：根据GenBank报道的TRAIL基因的序列及文献报道设计合成引物，进行PCR扩增，PCR产物用胶回收试剂盒回收纯化，纯化后的产物常规进行酶切鉴定和DNA序列分析；

(2)Ad/gTRAIL表达载体的构建：hTERT靶向到TRAIL基因上。将纯化的TRAIL基因PCR产物片段，通过连接酶定向插入hTERT载体中，构建成Ad/gTRAIL的腺病毒载体，再通过GAL4的调控子增强hTERT介导的GFP/TRAIL融合基因的表达；

(3)Ad/gTRAIL表达载体与溶癌病毒载体的重组：在Ad/gTRAIL的腺病毒载体基础上与溶癌病毒载体进行重组，组成一个新的病毒，称之为重组肿瘤特异的TRAIL溶癌病毒(Ad/TRAIL-E1)；Ad/TRAIL-E1进行进一步扩增纯化后，用紫外分光光度计测定纯度并定量。