[发明专利]土豆磷酸化酶的分离提取方法无效
申请号: | 200710027173.2 | 申请日: | 2007-03-16 |
公开(公告)号: | CN101050454A | 公开(公告)日: | 2007-10-10 |
发明(设计)人: | 杨立群;孔韬;梁秋仪;张黎明 | 申请(专利权)人: | 中山大学 |
主分类号: | C12N9/12 | 分类号: | C12N9/12 |
代理公司: | 广州市华学知识产权代理有限公司 | 代理人: | 裘晖 |
地址: | 510275广*** | 国省代码: | 广东;44 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 土豆 磷酸化酶 分离 提取 方法 | ||
1、一种土豆磷酸化酶的分离提取方法,其特征在于包括如下步骤:
(1)将450~800克土豆去皮、切块,搅碎成土豆汁;在土豆汁中加入亚硫酸钠溶液,使土豆汁混合溶液中亚硫酸钠的浓度为0.1~0.3克/升;高速冷冻离心土豆汁,除去白色沉淀物A即土豆淀粉,调节上层离心清液I的pH至6.0~8.0;
(2)加热离心清液I至50~70℃,恒温搅拌30~90分钟,高速冷冻离心,除去白色沉淀物B即失活的淀粉酶,得到离心清液II;
(3)在离心清液II中加入硫酸铵溶液,调节溶液密度至1.05~1.10克/毫升,于0~4℃静置2~6小时后,高速冷冻离心,除去白色沉淀物C即杂蛋白,得到离心清液III;
(4)在离心清液III中加入硫酸铵溶液,调节溶液密度至1.15~1.25克/毫升,于0~4℃静置6~12小时后,高速冷冻离心,收集白色沉淀物D即粗土豆磷酸化酶;
(5)将步骤(4)收集的粗土豆磷酸化酶溶于15~25毫升缓冲溶液中,高速冷冻离心,除去不溶性杂质,制得土豆磷酸化酶液。
2、根据权利要求1所述的土豆磷酸化酶的分离提取方法,其特征在于:所述高速冷冻离心条件:温度为2~6℃,转速为10000~20000转/分,时间为10~50分钟。
3、根据权利要求1所述的土豆磷酸化酶的分离提取方法,其特征在于:所述步骤(1)中的上层离心清液I的pH值采用浓氨水、碳酸钠溶液或氢氧化钠溶液调节。
4、根据权利要求1所述的土豆磷酸化酶的分离提取方法,其特征在于:所述步骤(5)中的缓冲溶液的pH为6.5~7.6。
5、根据权利要求1所述的土豆磷酸化酶的分离提取方法,其特征在于:所述步骤(5)中的缓冲溶液为磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液、磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液、巴比妥钠-盐酸缓冲液、Tris-盐酸缓冲液或者硼酸-硼砂缓冲液。
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