[发明专利]HLA－B27磁性酶联免疫试剂盒及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于医疗器械领域，具体地是涉及一种HLA-B27磁性酶联免疫试剂盒及其制备 方法。

背景技术

强直性脊椎炎(ankylosing spondylitis，AS)是一种结缔组织疾病，在人群中的患病率 为0.2％-0.4％，发病年龄大多在30岁以内，占65％。平均病程4-6年。主要症状是腰、骶 及下肢关节疼痛。常伴有晨僵、夜间重、活动后轻等特点。与成年人的AS不同，青少年AS 在发病初期引起骨骼病变的症状出现较少，可能有24％的儿童主诉四肢关节痛或只有足跟痛， 但末梢关节病变表现已很明显。AS主要表现为椎间盘纤维环和纤维环附近结缔组织的骨化、 椎间关节和四肢关节滑膜的炎症和增生。晚期患者脊柱僵硬呈板状，活动受限。晚期致残率 高。因而早期诊断、治疗具有重要意义。

人类白细胞抗原(humanleukocyte antigen，HLA)是白细胞膜上的一种同种抗原，依不同 的位点编码，具有重要的生理功能。早在1973年，Brewerton等报道了HLA—B27与强直性 脊柱炎(ankylosing spondylitis，AS)强相关。在AS患者中，88％—96％的患者具有HLA-B27 抗原，而正常对照组中具有B27抗原者仅为4％-8％。相对危险率达90％。

尽管HLA—B27与强直性脊柱炎有很强的相关性，但查出HLA—B27阳性并不能确诊为 强直性脊柱炎，HLA—B27是强直性脊柱炎的一个易发病的因素。

HLA-B27检测不能作为血清学阴性脊柱关节病的确诊指标，但在以下几个方面将有助于 诊断：

1如果症状和体征提示脊柱关节病变发生的可能性超过50％，那么B27抗原阳性显著增加正 确诊断的机会。

2背痛及强直的患者，B27抗原阴性强烈提示患有其他疾病。在不伴有牛皮癣及炎症性小肠 病变时，B27抗原阴性可排除AS诊断。

3患有炎症性关节病变的青少年，B27抗原阳性可提示，可能会发生血清学阴性脊柱关节病 变。

4预测AS患者家庭成员发生AS的可能性。如果某成员携带有与AS相关的单倍型，尤其是 男性，则预示其发病的可能性较大，为20％-30％，不带有该单倍型者，发病的可能性极小， 几乎为0。

早期检测HLA-B27抗原的方法是微量淋巴细胞毒试验(microlymphocytotoxicity test， MLCT)。该方法费时费力，现已逐渐被流式(flow cytometry，FC)所取代。但FC价格昂贵， 操作复杂。最近，又发展了以PCR为基础的方法，虽然该方法准确性高，但不适合做大样本 快速筛查。

酶标免疫磁性抗体分离检测技术(Magnetic Anti—body Immu no Assay MAIA)是一项高灵敏度的酶免技术，其检测灵敏度可达到放射免疫法 的水平。它将免疫磁性微珠分离技术引入酶联免疫测定领域。磁性微珠连接的单克隆抗体与 相应的标本抗原结合后，在磁力的作用下，特异性结合的抗原与其它物质分离，再通过酶联 免疫显色反应，测定其含量。迄今为止，还未有人将该技术应用到HLA-B27抗原检测。

发明内容

本发明需要解决的技术问题之一是提供一种HLA-B27磁性酶联免疫试剂盒，该试剂盒 建立在磁性免疫分离和酶检测原理上，具有快速、简单、准确性高等优点。

解决上述技术问题的技术内容为：

一种HLA-B27磁性酶联免疫试剂盒，主要包括酶稀释液，酶结合物，还包括有：

包被有与HLA-B27抗体共价耦联免疫磁性微珠的微孔板板条。

优选地，所述酶结合物为耦联有抗CD45抗体的HRP，即抗CD45酶结合物。

HLA-B27抗体与抗CD45酶结合物的稀释度为1：50。

该试剂盒还包括有，HRP耦联HLA—B27抗体分子的阳性对照。

酶稀释液优选为加有1％BSA(小牛血清白蛋白)、0.1％Proclin300的0.01M PBS缓冲 液。

本发明所述HLA-B27磁性酶联免疫试剂盒用于检测EDTA-K3(乙二胺四乙酸三钾)作 为抗凝剂的全血标本。

本发明的另一需要解决的技术问题是提供上述HLA-B27磁性酶联免疫试剂盒的制备方 法。

一种HLA-B27磁性酶联免疫试剂盒的制备方法，主要包括以下步骤：