[发明专利]一种制备别藻蓝蛋白类荧光蛋白质的方法有效
| 申请号： | 200710029673.X | 申请日： | 2007-08-09 |
| 公开（公告）号： | CN101144077A | 公开（公告）日： | 2008-03-19 |
| 发明（设计）人： | 夏坤;佟顺刚 | 申请（专利权）人： | 广州天宝颂原生物科技开发有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/09 | 分类号： | C12N15/09;C07K14/405 |
| 代理公司： | 广州市南锋专利事务所有限公司 | 代理人： | 刘媖 |
| 地址： | 510663广东省广州市科学*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 制备 别藻蓝 蛋白 荧光 蛋白质 方法 | ||
1.一种制备别藻蓝蛋白类荧光蛋白质的方法，其特征在于它包括以下步骤：
(1)将beta裂合酶基因或其同源基因克隆于表达载体中，得到beta裂合酶表达质粒；将别藻蓝蛋白类脱辅基蛋白基因或其同源基因克隆于第二个表达载体中，得到脱辅基蛋白表达质粒；将藻蓝胆素生物合成酶基因(ho1和pcyA)或其同源基因克隆于第三个表达载体中，得到藻蓝胆素合成质粒；
(2)将beta裂合酶表达质粒或脱辅基蛋白表达质粒或藻蓝胆素生物合成酶质粒依次转入配套的宿主菌；当这些表达质粒都转入宿主菌后，得到相应的工程菌，应用此工程菌通过发酵工程能生产别藻蓝蛋白类荧光蛋白质；发酵后，按常规蛋白质提纯技术，提纯得到相应的别藻蓝蛋白类荧光蛋白质。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：应用beta裂合酶催化藻胆色素与别藻蓝蛋白类脱辅基蛋白进行共价结合而制备别藻蓝蛋白类荧光蛋白质。
3.根据权利要求1和2所述的方法，其特征在于：将beta裂合酶表达质粒、脱辅基蛋白表达质粒、藻蓝胆素生物合成酶质粒依次转入配套的宿主菌；当这些表达质粒都转入宿主菌后，得到相应的工程菌，应用此工程菌通过发酵工程能生产别藻蓝蛋白类荧光蛋白质。
4.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：beta裂合酶基因是指与Anabaenasp.PCC7120中a1r0617基因或Synechocystis sp.PCC 6803中s1r2049基因同源的基因；别藻蓝蛋白类脱辅基蛋白基因是指与Anabaena sp.PCC7120或Synechocystis sp.PCC6803中别藻蓝蛋白基因同源的基因。
5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：beta裂合酶基因是指与Anabaena sp.PCC7120中a1r0617基因或Synechocystis sp.PCC 6803中s1r2049基因同源的基因；别藻蓝蛋白类脱辅基蛋白基因是指与Anabaena sp.PCC7120或Synechocystis sp.PCC6803中别藻蓝蛋白基因同源的基因。
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