[发明专利]一种链霉亲和素标记的结合藻红胆素的藻蓝蛋白类荧光蛋白质的制备方法有效
| 申请号： | 200710032898.0 | 申请日： | 2007-12-27 |
| 公开（公告）号： | CN101469331A | 公开（公告）日： | 2009-07-01 |
| 发明（设计）人： | 赵开弘;周明;夏坤;佟顺刚 | 申请（专利权）人： | 广州天宝颂原生物科技开发有限公司;华中科技大学 |
| 主分类号： | C12N15/60 | 分类号： | C12N15/60;C12N15/52;C12N15/31;C12N15/70;C07K14/405 |
| 代理公司： | 广州市南锋专利事务所有限公司 | 代理人： | 刘 媖 |
| 地址： | 510663广东省广州市科学*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 亲和 标记 结合 藻红胆素 蛋白 荧光 蛋白质 制备 方法 | ||
1.一种链霉亲和素标记的结合藻红胆素的藻蓝蛋白类荧光蛋白质的制备方法，其特征在于包括下述步骤：
(1)用基因工程方法，将beta155裂合酶基因克隆于表达载体中，得到beta155裂合酶表达质粒；
(2)用基因工程方法，将藻蓝蛋白类脱辅基蛋白基因与链霉亲和素基因拼接后克隆于第二个表达载体中，得到链霉亲和素标记的脱辅基蛋白表达质粒；
(3)用基因工程方法将藻红胆素生物合成酶基因hol和pebB克隆于第三个表达载体中，得到hol和pebB表达质粒；
(4)用基因工程方法将藻红胆素生物合成酶基因pebA克隆于第四个表达载体中，得到pebA表达质粒；
(5)将beta155裂合酶表达质粒、链霉亲和素标记的脱辅基蛋白表达质粒、hol和pebB表达质粒及pebA表达质粒依次转入配套的宿主菌，当这些表达质粒都转入宿主菌后，得到相应的工程菌，应用此工程菌通过发酵工程生产链霉亲和素标记的结合藻红胆素的藻蓝蛋白类荧光蛋白质；发酵后，按常规蛋白质提纯技术，提纯得到相应的链霉亲和素标记的结合藻红胆素的藻蓝蛋白类荧光蛋白质；
以上各步骤中所述的宿主菌为大肠杆菌，所述的beta155裂合酶基因是指Anabaena sp.PCC7120中all5339基因，所述的藻蓝蛋白类脱辅基蛋白基因是指Anabaena sp.PCC7120或M.laminosus sp.PCC7603中cpcB基因，所述的藻红胆素生物合成酶基因hol是指Anabaenasp.PCC7120中的hol基因，所述的藻红胆素生物合成酶基因pebA和pebB分别是指Calothrixsp.PCC7601中pebA和pebB基因。
2.一种链霉亲和素标记的结合藻红胆素的藻蓝蛋白类荧光蛋白质的制备方法，其特征在于包括下述步骤：
(1)用基因工程方法，将beta155裂合酶基因、藻蓝蛋白类脱辅基蛋白基因与链霉亲和素基因拼接后同时克隆于表达载体中，得到beta裂合酶和链霉亲和素标记的脱辅基蛋白表达质粒；
(2)用基因工程方法将藻红胆素生物合成酶基因hol和pebB克隆于第二个表达载体中，得到hol和pebB表达质粒；
(3)用基因工程方法将藻红胆素生物合成酶基因pebA克隆于第三个表达载体中，得到pebA表达质粒；
(4)将beta155裂合酶和链霉亲和素标记的脱辅基蛋白表达质粒、hol和pebB表达质粒及pebA表达质粒依次转入配套的宿主菌，当这些表达质粒都转入宿主菌后，得到相应的工程菌，应用此工程菌通过发酵工程生产链霉亲和素标记的结合藻红胆素的藻蓝蛋白类荧光蛋白质；发酵后，按常规蛋白质提纯技术，提纯得到相应的链霉亲和素标记的结合藻红胆素的藻蓝蛋白类荧光蛋白质；
以上各步骤中所述的宿主菌为大肠杆菌，所述的beta155裂合酶基因是指Anabaena sp.PCC7120中all5339基因，所述的藻蓝蛋白类脱辅基蛋白基因是指Anabaena sp.PCC7120或M.laminosus sp.PCC7603中cpcB基因，所述的藻红胆素生物合成酶基因hol是指Anabaenasp.PCC7120中的hol基因，所述的藻红胆素生物合成酶基因pebA和pebB分别是指Calothrixsp.PCC7601中pebA和pebB基因。
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