[发明专利]尼古丁处理后树突状细胞用于预防和治疗肿瘤

说明书

技术领域

本发明属于生物技术和医学领域。具体而言，本发明涉及用尼古丁处理树突状细胞的方法，还涉及通过该方法得到的可用于预防和治疗肿瘤的树突状细胞及其组合物和用途。

背景技术

肿瘤，是当前威胁人类健康的主要疾病之一。据WTO统计，2002年全世界因恶性肿瘤死亡人数达710.6万。我国2000年癌症发病人数180-200万，死亡人数140-150万。因此，肿瘤发生及其预防和治疗已成为生命科学领域研究的重点和热点。

肿瘤发生是一个极为复杂的过程，它涉及机体外部多因素、机体内部多系统，由外部因素通过内部因素发挥交互作用而进行的过程，即是一个系统性疾病的过程。

免疫系统在机体内发挥着免疫防御、免疫调节、免疫监视的功能，该功能的发挥主要依赖于机体固有免疫应答和适应性免疫应答。现在的研究表明，树突状细胞(Dendritic cell，DC)启动适应性免疫应答的启始阶段(即启动对抗原的摄取和递呈)，并对固有性免疫应答的主要成分自然杀伤细胞(Nature Killer cell，NK)的功能具有调节作用。因此，树突状细胞已成为肿瘤免疫治疗的研究热点。

多个实验系统证实，经肿瘤抗原、肿瘤裂解物、肿瘤抗原肽负载的树突状细胞能够在机体内诱导针对肿瘤的免疫应答，并导致肿瘤的消退。此方法在人体临床实验中也已获得初步成功，并由此证实了在肿瘤发生前建立针对肿瘤的特异性免疫可以预防肿瘤的形成，该理论成为肿瘤疫苗研制的理论基础。基于肿瘤抗原诱导特异性免疫应答的肿瘤免疫治疗方法成为手术、化疗、放疗的有益补充和替代治疗手段。

树突状细胞是介导机体产生抗肿瘤免疫的关键细胞。增强树突状细胞的诱导免疫应答的能力成为肿瘤免疫治疗的关键，其方法包括肿瘤抗原负载、抗原基因转染、肿瘤总RNA负载、细胞因子刺激等。然而，细胞因子刺激或分子转染中刺激物的稳定性相对较差，其还存在价格昂贵、及使用不便的缺点。

乙酰胆硷、胆碱酯酶和乙酰胆硷烟碱样受体(nicotinic acetylcholinereceptor，nAchR)在神经系统和非神经细胞(如免疫细胞、内皮细胞和上皮细胞)中有广泛的表达。nAchR配体——尼古丁，是由芳族六元环(吡啶)和脂族五元环(吡咯烷)通过单键连接而形成的天然化合物。提纯后的尼古丁是一种味苦、无色透明的油质液体，挥发性强，在空气中极易氧化成暗灰色，能迅速溶于水及酒精中，通过口鼻支气管粘膜很容易被机体吸收，粘在皮肤表面的尼古丁亦可被吸收渗入体内。它具有性质稳定、易于获得和价廉的优点。

(-)-尼古丁

目前，尼古丁作为药物已广泛应用于神经退行性疾病和溃疡性结肠炎的治疗，但尚未有关于用尼古丁处理树突状细胞，并将处理后的树突状细胞用于肿瘤的预防和治疗的文献报道。

本领域迫切需要找到可简单、经济、安全、有效地增强树突状细胞诱导免疫应答的能力的方法和试剂，并需要开发出可有效用于肿瘤免疫治疗的树突状细胞及其组合物。

发明内容

本发明的目的正是提供一种通过尼古丁刺激，可用于预防和治疗肿瘤的树突状细胞及其组合物，以及该细胞或组合物在制备预防和治疗肿瘤的药物中的用途。

在本发明的第一方面中，提供了一种制备树突状细胞方法，所述方法包括以下步骤：

(1)在摩尔浓度为1×10^-9～1×10^-3摩尔/升的尼古丁或其盐存在的条件下，培养未成熟的树突状细胞；

(2)收集处理后的树突状细胞。

在本发明的一个优选例中，步骤(1)中的培养时间为6-72小时，更优选8-48小时，更优选10-24小时，最优选12-14小时。

在本发明的一个优选实施方式中，所述方法还包括步骤：在步骤(1)和(2)之间，使步骤(1)中所得的尼古丁处理后的细胞与肿瘤抗原接触。

在本发明的一个优选例中，所述肿瘤抗原是肿瘤细胞的裂解物、溶解物或人工合成的肿瘤抗原。

在本发明的另一优选例中，所述接触时间为1-24小时，更优选2-12小时，更优选3-8小时，最优选4小时。

在本发明的另一优选例中，所述肿瘤抗原的浓度为0.1-10mg/ml，优选0.5-5mg/ml，最优选1-2mg/ml。

在本发明的一个优选实施方式中，所述尼古丁或其盐的浓度为1×10^-8～1×10^-4摩尔/升。