[发明专利]从鲨鱼皮分离纯化生物医药用胶原蛋白的方法

说明书

技术领域：

本发明涉及一种分离纯化生物医学用胶原蛋白的方法，特别是涉及一 种从鲨鱼皮中分离纯化生物医学用胶原蛋白的方法。

背景技术：

胶原蛋白或称胶原是由动物细胞合成的一种生物性高分子，广泛存在 于动物骨、脚、软骨和皮肤及其它结缔组织中，约占哺乳动物总蛋白的1/ 3，是人体重要的细胞外基质成份，胶原具有良好的生物学特性，可作为组 织的支持物，对细胞、组织乃至器官行使正常功能并对外伤修复有重大影 响。国内外对胶原蛋白的利用主要分为两大类：一是着眼于胶原蛋白独特 的宏观物理性能，即纤维性能，用于相纸底片、纺织、造纸等；二是着眼 于其内在性能，即胶原的生物功能，用于食品保健、饲料、美容化妆品、 医用材料等，胶原具有重要的生物学性质，力学性能高、促进细胞生长、 止血、生物相容性和生物降解性，可用作皮肤烧伤、烫伤的修补，治疗和 护理，能够减轻烧伤、烫伤的程度，杜绝感染，其在治疗烧、烫伤方面起 着非常重要的作用，它可加工成“人工皮肤”，直接敷于烧、烫伤之皮肤 表面，尤其对于大面积、深度在III级以上重患者，类人胶原蛋白可用作人 工血管，实用血管嫁接以及人体受损组织的修补，例如因突发疾病，胃出 血、穿孔、胶原蛋白可结合抗生索，细胞促生因子等对受损组织可进行修 补，胶原蛋白可与骨粉、骨蛋白结合后用于肢体延伸，胶原蛋白可制作人 工器官、心脏起搏器，人体内脏的充填物等，胶原蛋白也是一种新型的生 物发酵培养基，含氨基酸种类齐全，具有微生物培养的独特功效，是细菌 学培养、生物发酵培养基的最佳原料之一。此外，由胶原制备的材料，可 以扩散到皮肤的深层，对人的皮肤有很好的营养作用，同时由于其分子中 含有大量的羟基，它有着相当好的保湿作用。据调查在2003年最畅销保养 品评比中，胶原蛋白最受青睐，胶原蛋白在国外流行多年，欧美不少化妆 品研发中心推出含胶原蛋白成份保养品，全球胶原蛋白目前产值超过40亿 美元。关于胶原蛋白提取纯化方面，虽然方法各异，但大多数是从鱿鱼、 鳕鱼等小型鱼类及家畜的皮中提取，小型鱼类本身所含胶原蛋白量少，原 料有限，而从家畜皮肤中提取的此类蛋白溶解度低，并且以牛类为原料不 易被世界许多贸易组织所接受，目前提取胶原蛋白的步骤包含萃取、分离 和提纯，萃取又分为酸法、碱法中性盐法和酶法等，工艺繁琐，也有用基 因工程方法制备蛋白，但同时又增加了成本，由于上述这些分离技术存在 的这些缺陷，使得制得的胶原蛋白产率、产量、质量都不高，以使生物医 学用胶原蛋白价格高昂，最后，大大影响了胶原蛋白的广泛应用，因此， 降低胶原蛋白纯化成本和提高蛋白质量是关键。

发明内容：

本发明的目的是要提供一种从鲨鱼皮分离纯化生物医药用胶原蛋白的 方法，它不但能有效地从鲨鱼皮肤中提取高质量胶原蛋白，而且，工艺简 单，成本低廉，产率较高。

为了达到上述的目的本发明是这样实现的：本发明的从鲨鱼皮分离纯 化生物医药用胶原蛋白的方法所使用的原料为鲨鱼皮，且从中分离纯化生 物医学用胶原蛋白的方法操作如下：

(1)、将鲨鱼皮用pH值为7.4-7.6的低浓度磷酸盐缓冲液浸泡冲洗去掉鳞 和残肉，并切成小块，再用去离子水浸泡冲洗3～5次；

(2)、清洗干净的鱼皮且用原料量五倍的pH值为7.4-7.6的中浓度磷酸盐 缓冲液浸泡70～75小时后，匀浆15min，在温度为4℃，转速为10000rpm， 离心15min，取上清液；

(3)、再沉淀重复(2)的过程一次，将合并上清液，加硫酸铵至饱和度 80％，在温度为4℃，转速为8000rpm，离心15min，保留沉淀；

(4)、将沉淀溶在pH值为7.0的中浓度磷酸缓冲液中；

(5)、用G-75，100，150葡聚糖层析上述溶解液，收集蛋白溶出液于温 度为4℃，转速为10000rpm，离心15min，上清液浓缩，冷冻干燥后得到生 物医学用胶原蛋白。

所述的低浓度磷酸盐缓冲液是浓度为8-12mM，pH值为7.4-7.6的磷酸 氢二钠缓冲液，所述的中浓度磷酸盐缓冲液是浓度为80-120mM，pH值为 7.4-7.6的磷酸氢二钠缓冲液，所述的中浓度磷酸缓冲液的浓度为180- 220mM，pH值为7.0，其用量为1.5g/ml。

由于本发明以鲨鱼皮为材料，通过碱洗、透析等方法提取和纯化胶原 蛋白，因此具有以下优点：