[发明专利]一种基于半推理设计的基因体外定向进化体系

权利要求书

1.一种基于半推理设计的基因体外定向进化方法，包括如下步骤：1)基因 改组；2)高通量筛选；3)序列分析；4)基因半推理设计：根据突变基因序 列推导出突变基因的氨基酸序列与原始基因相比变化的位点，并根据突 变位点设计简并引物；5)基因再改组；6)高通量筛选，其中，所述基因 为β-半乳糖苷酶基因HLacZ。

2.根据权利要求1所述的基于半推理设计的基因体外定向进化方法，其特 征在于，步骤1)通过DNA片段的PCR扩增、DNA片段PCR产物用 DNA酶降解得到50-100bp的小片段、小片段进行无引物的PCR扩增得 到200-400bp的片段以及取无引物PCR产物为模板进行引物PCR扩增 四步，获得基因DNA片段的突变体库。

3.根据权利要求1所述的基于半推理设计的基因体外定向进化方法，其特 征在于，步骤2)指含改组突变的基因库大肠杆菌表达质粒库的构建和 筛选：将回收的改组突变的基因库经过BamHI和SacI双酶切后，植入 表达载体中，该质粒通过检测突变基因的表达产物与其底物作用，来筛 选所需要的改组突变的基因；将含有突变的基因库的表达载体质粒转入 宿主菌中，在含有LB固体培养基上培养，筛选得到阳性菌，获得突变 个体。