[发明专利]全封闭式无菌细胞培养方法

说明书

技术领域

本发明属于细胞培养领域，特别涉及大规模，不添加抗生素的细胞培 养方法。

背景技术

人体细胞治疗技术是一门连结基础研究和商业应用的综合性桥梁学 科。尤其是在人们对干细胞的认识不断加深的情况下，通过干细胞的分离 和体外培养，定向诱导分化成胰岛细胞、神经元细胞、心肌细胞等，将这 些细胞移植在发病部位，修复病人的组织或器官，从而使患者免受病魔的 煎熬。由于移植的细胞与患者的决定簇基因完全相同，不会产生通常器官 移植中的免疫排斥反应，修复的组织或器官将良好的履行职责，无需使用 免疫抑制剂。生物体细胞治疗技术是建立在细胞生物学、分子生物学、有 机化学、遗传学等学科基础之上，使上述情况成为现实和可能，给我们人 类带来一场新的医学革命，将利用生物组织工程学的方法衍生出一项完全 崭新的再生医疗产业。

细胞生物治疗做为一种新型的治疗手段，可以在癌症、自身免疫疾病 等疾病中起到治疗作用，而且比传统化疗手段更为有效。生物治疗中的重 要环节是细胞培养，而细胞培养技术中面临的主要问题是污染，为了防止 污染，目前最常用的是在培养基中添加抗生素，但是随着社会的发展，由 于抗生素使用产生耐药性的影响已经越来越受到关注。事实上，在抗生素 投入使用至今的仅仅60年间，很多细菌就对抗生素产生了严重的耐药，有 的甚至产生了多重耐药。耐药菌的出现是人类不合理使用抗生素的直接后 果，并且细菌产生耐药性的速度远远快于人类新药开发的速度，如不遏止， 人类将进入“后抗生素时代”，也即回到抗生素发现之前的人们面对细菌 性感染束手无策的黑暗时代。而且中国已成为世界上滥用抗生素最为严重 的国家之一，WHO在国际范围内的多中心调查显示，住院患者抗菌药物使用 约30％，而我国住院患者中使用抗生素的占80％～90％，其中使用广谱抗生 素或联合使用两种以上抗生素的占58％，就连门诊感冒患者都有75％应用抗 生素，大大超过了已经很不正常的国际平均水平。目前，细胞培养为了防 止污染多采用抗生素，这就导致细胞耐药性的产生，而抗生素的滥用在我 国已经非常严重。

为了使注入体内的细胞更为安全可靠，我们迫切需要建立高级净化层 流无菌生产车间及生产工艺，在每一个环节上都严格要求，确保没有细菌 污染，以彻底解决细胞体外培养使用抗生素的历史。这一瓶颈问题的解决， 将确保我国人体细胞能大规模地进入体外培养阶段，从而推动生物治疗尤 其是肿瘤生物治疗产业化的进程，造福于广大患者。

因此本领域迫切需要开发出高级净化层流无菌生产工艺，在该工艺中 不添加抗生素，以此培养出的细胞更为安全可靠。

发明内容

发明人致力于在人体细胞体外工业化培养中去除抗生素，同时保证人 体细胞在培养过程中不被污染，人体细胞培养质量不受影响。

本发明的目的就是提供一种全封闭式无菌细胞培养方法。

本发明提供了一种全封闭式无菌细胞培养方法，即对进入细胞培养区 域的人员、物体、空气分别进行无菌化处理，本发明所述的细胞培养区域 为全封闭式。本发明方法可以用于培养各种细胞，包括人体细胞，如淋巴 细胞。

在一实施例中，本发明细胞培养方法还包括独立的细胞预处理步骤， 使进入细胞培养区域的细胞无污染。即在大规模细胞培养之前，先检测细 胞是否被污染，检测为阴性的细胞才送入细胞培养区域进行扩增培养。

较佳的，上述人员无菌化处理步骤为：操作人员进入细胞培养区域之 前依次进行体检、沐浴、泡手灭菌，然后穿戴无菌工作服。

较佳的，上述物体无菌化处理步骤为对物体进行消毒或灭菌。本领域 技术人员可以根据物体的不同性能，选择合适的方式进行消毒或灭菌。如 对能承受高温湿热消毒灭菌的物体进行高温湿热消毒；对于不能承受高温 湿热灭菌的物体，采用化学灭菌或辐照灭菌。

较佳的，上述空气无菌化处理步骤为：空气新风补充量控制在30％±5％； 对于新风口防尘无纺布、中效空气过滤器和高效空气过滤器定期更换。

较佳的，上述中效空气过滤器每半年更换一次。

较佳的，上述高效空气过滤器每年更换一次。

较佳的，上述新风口防尘无纺布每两周更换一次。

更佳的，上述空气无菌化还包括：细胞培养结束后，开启负离子发生 器，运行30—90分钟。在实施例中，负离子发生器的运行时间设定为45 分钟。