[发明专利]一种抗高血压的酪蛋白活性肽及其生产方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种酪蛋白活性肽，特别涉及一种从酪蛋白中生产具有抗高血压功能的活性肽的方法，以及由该方法制得的具有抗高血压功能的酪蛋白活性肽及其应用。

背景技术

动物乳，常见的如牛乳是一种成分复杂的生物流体，其中蛋白质含量为32g/L，主要由酪蛋白和乳清蛋白组成，而酪蛋白大约占80％(26g/L)，是含磷的几种蛋白质的复合体，以胶体形式存在于牛乳中。牛乳蛋白质在营养上是优质的全价蛋白质，蕴藏着多种生物活性肽片段，在生理上有许多作用。

血管紧张素转化酶(Angiotensin-converting enzyme，ACE)(EC3.4.15.1)是一种多功能的两条肽链组成的酶，ACE是一种膜结合外在金属蛋白酶，主要存在于血管内皮细胞以及其他种类的细胞。人体肾脏可以分泌一种特异性的蛋白酶，即肾素。肾素作用于血管紧张素(一个存在于血管中相对分子质量为57Kda的糖蛋白)可以释放出一种无活性的血管紧张素I(十肽：DRVYIHPFHL)，ACE可以使无活性的血管紧张素I的C-末端水解两个氨基酸后转变成有活性血管紧张素II(八肽：DRVYIHPF)，血管紧张素II可以降低血液的流速，减少肾脏水分和盐的分泌，会导致血管平滑肌收缩，引发高血压，同时ACE可水解血管舒缓激肽使其失活，而血管舒缓激肽可以舒张血管，使血压降低。

目前文献报道的大部分降血压肽产品为ACE抑制物(ACEI)，但没有经过动物实验的验证环节，很难确定为是真正的抗高血压活性肽产品。例如1982年，Maruyama等(Maruyama S.，Suzuki H.A peptide inhibitor ofangiotensin I converting enzyme in the tryptic hydrolysate of casein.Agric.Biol.Chem.1982，46：1393-1399.)采用胰蛋白酶水解酪蛋白，首次从酪蛋白中获得了具有抑制ACE活性的三种肽Pro-Pro、Ala-Pro、Ala-Hyp；而有些具有降血压功能的活性肽是经过酪蛋白发酵产生，而不是通过酶解作用产生，例如用L.helveticus和S.cerevisiae发酵得到的酸奶，以5mL/kg(体重)的剂量饲喂SHR，可在6～8h内明显地降低其心脏收缩压(Maeno M，Yamamoto N，Takano T.Identification of an antihypertensive peptide from casein hydrolysateproduced by a proteinase from Lactobacillus helveticus CP 790.J Dairy Sci.1996，79：1316-1321.)。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种从酪蛋白中生产具有抗高血压功能的活性肽的方法，以及由该方法制得的具有抗高血压功能的酪蛋白活性肽。

本发明人选用碱性蛋白酶Alcalase，通过控制一定的条件，如底物浓度、酶与底物的用量比例、酶解温度、pH值及时间等来水解酪蛋白，经过纯化、脱盐、干燥等常规后续处理步骤得到肽产品，意外地发现其不仅具有良好的抑制ACE功能，还具有良好的降血压功能。

因此，本发明通过下列技术方案来解决上述技术问题：一种从酪蛋白中生产具有抗高血压功能的活性肽的方法，其包括酶解反应及将酶解物脱盐的步骤，其中所述的酶解反应中底物为酪蛋白水溶液，酶选用蛋白酶Alcalase，酶的用量为0.072AU/g酪蛋白，整个反应过程中的温度控制在55℃～60℃，pH在8.4～8.6范围，一般酶解时间为5～6小时左右。

其中，底物酪蛋白的浓度太低太高，反应均不易控制。本发明优选的底物浓度约为12～18w/v％，当浓度低于12％时，易造成酶浪费，反之当浓度超过18％时，酪蛋白水溶液太浓稠，不利于在酶解过程中进行搅拌，从而造成水解不彻底。本发明最优选的底物浓度则在15％左右，此时，浓度适合，最利于搅拌，水解反应均衡。

本发明所采用的蛋白酶Alcalase的酶活力为2.4AU/g，故其用量换算成占酪蛋白的重量百分比为3％。

通过控制酶解条件在上述范围，根据下列公式，可计算出本发明酶解液的水解度为25％。