[发明专利]稳定神经肌肉接头的乙酰胆碱受体聚集的方法

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及调节神经肌肉接头的乙酰胆碱受体聚集物稳定性的方法。

背景技术

神经肌肉接头形成于运动神经元和肌肉纤维之间。AChR在突触后膜上形成聚集体，以保证有效的、精确的突触传递。AChR形成聚集体的过程是一个动态的过程，新形成的被运动神经末梢支配的AChR聚集体能被运动神经元分泌的一种糖蛋白一聚集素Agrin以及肌细胞自己合成的与AChR结合的蛋白-偶联蛋白Rapsyn所稳定。同时，运动神经元也释放负向调节的因子来消散没有被神经支配的AChR聚集体，从而优化突触后结构。遗传学的证表明，ACh可能就是这样一种负向调节因子。在缺乏乙酰胆碱转移酶-ChAT(一种ACh合成的关键酶)的突变小鼠中发现AChR聚集物体变大，同时与Agrin敲除的突变小鼠相比，在Agrin和ChAT双敲除的突变小鼠中，更多的AChR聚集体保留下来没有被消散。正向和负向因子的协同作用对于神经末梢与突触后结构的精确匹配是非常重要的。

现在有研究显示一种细胞内的丝氨酸/苏氨酸激酶Cdk5可能是AChR聚集物消散和优化过程中的效应分子。ACh能够激活Cdk5。遗传上敲除Cdk5基因或者用药理学的方法抑制Cdk5的活性能增加体外培养肌肉细胞形成的AChR聚集体的大小并改善Agrin敲除的突变小鼠的表型。ACh引起的消散作用能够被Agrin所拮抗，可能是通过Agrin激活聚集在神经肌肉接头突触后膜上的一种肌肉特异的酪氨酸受体激酶-Musk来实现的。因此，由ACh和Cdk5引起的全局性的抑制作用在局部被Agrin的信号通路所逆转，使得AChR聚集物最终在突触部位稳定下来。Rapsyn一直以来被认为是Agrin引起的AChR聚集体形成和稳定过程中的关键信号分子。然而Rapsyn的效应分子尚不清楚。

因此，本领域还有必要进一步研究神经肌肉接头中AChR聚集体的形成和消散的机制以及其中产生关键作用的一些因子，从而为相关疾病如重症肌无力等的预防或治疗提供有效的途径。

发明内容

本发明的目的在于提供调节神经肌肉接头的乙酰胆碱受体聚集物稳定性的方法。

在本发明的第一方面，提供钙依赖蛋白酶Calpain或其激动剂或拮抗剂的用途，用于制备调节神经肌肉接头的乙酰胆碱受体(AchR)聚集物稳定性的制剂。

在另一优选例中，所述的钙依赖蛋白酶Calpain的激动剂不包括胆碱能激动剂CCh(卡巴胆碱，carbachol)；和/或所述的钙依赖蛋白酶Calpain的拮抗剂不包括聚集素(agrin)。

在另一优选例中，所述的钙依赖蛋白酶Calpain的拮抗剂用于制备提高乙酰胆碱受体聚集物稳定性的制剂。

在另一优选例中，所述的提高乙酰胆碱受体聚集物稳定性的制剂用于预防或治疗肌肉萎缩或重症肌无力(myasthenia gravis)。

在另一优选例中，所述的钙依赖蛋白酶Calpain或其激动剂用于制备降低乙酰胆碱受体聚集物稳定性的制剂。

在另一优选例中，所述的钙依赖蛋白酶Calpain的拮抗剂选自：Calpeptin，或Calpastatin(钙依赖蛋白酶抑制蛋白)。

在本发明的第二方面，提供钙依赖蛋白酶Calpain的用途，用于筛选调节神经肌肉接头的乙酰胆碱受体聚集物稳定性的制剂。

在本发明的第三方面，提供一种筛选调节神经肌肉接头的乙酰胆碱受体聚集物稳定性的潜在物质的方法，所述方法包括步骤：

(a)将候选物质与含有钙依赖蛋白酶Calpain的体系接触；

(b)观察候选物质对于钙依赖蛋白酶Calpain的表达或活性的影响；

其中，若所述候选物质可降低钙依赖蛋白酶Calpain的表达或活性，则表明该候选物质是提高神经肌肉接头的乙酰胆碱受体聚集物稳定性的的潜在物质；

若所述候选物质可提高钙依赖蛋白酶Calpain的表达或活性，则表明该候选物质是降低神经肌肉接头的乙酰胆碱受体聚集物稳定性的的潜在物质。

在另一优选例中，步骤(a)包括：在测试组中，将候选物质加入到含有钙依赖蛋白酶Calpain的体系中；和/或

步骤(b)包括：检测测试组的体系中钙依赖蛋白酶Calpain的表达或活性，并与对照组比较，其中所述的对照组是不添加所述候选物质的含有钙依赖蛋白酶Calpain的体系；