[发明专利]固相多肽合成曲普瑞林的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及曲普瑞林的制备方法，尤其涉及固相多肽合成曲普瑞林的制备方法。

背景技术

中文名：曲普瑞林，醋酸曲普瑞林，英文名：Triptorelin，Triptorelin Acetate

结构式：pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-Gly-NH₂，分子式：C₆₄H₈₂N₁₈O₁₃分子量：1311.5

曲普瑞林临床用于治疗相关性激素病症，包括晚期前列腺癌、子宫内膜异位、中枢 性性早熟症等。

曲普瑞林是一种促性腺激素释放激素类似物，主要作用于垂体前叶，大剂量应用初 期可以引起一过性黄体生成素(LH)和卵泡刺激素(FSH)释放增多，后期则导致垂体 敏感性降低，使LH、FSH和性激素分泌减少。醋酸曲普瑞林用于治疗相关性激素病症， 包括：晚期前列腺癌、子宫内膜异位、中枢性性早熟症。

1974年日本武田化工的Fujino Masahiko等人首先发明促黄体激素释放激素的十 肽酰胺类似物的合成工艺。并在日本、德国、美国等国家申请专利，专利号分别为： JP19740027442、DE2446005、US4008209(液相法)。

目前的方法均存在着一定的缺陷，每一轮脱帽须用三氟醋酸，故接肽收率低，导 致生产成本较高；三废污染多，并使用三氟醋酸进行纯化，污染环境，纯化收率一般在 25％以下。因此目前的方法限制了醋酸曲普瑞林的大规模生产和使用。

发明内容

本发明需要解决的技术问题是公开一种固相多肽合成曲普瑞林的制备方法，以克 服现有技术存在的上述缺陷。

本发明的方法包括如下步骤：

(1)以.Rink Amide AM树脂或.Rink Amide MBHA树脂起始原料，按照固相合成 的方法依次连接具有保护基团的氨基酸，获得保护十肽树脂，其间依次脱去Fmoc-保护 基团，同步进行脱侧链保护基团；

(2)切肽，获得粗品；

(3)粗品经C18(或C8)柱分离纯化，冻干后，制得曲普瑞林精品。

按照本发明，所说的依次连接具有保护基团的氨基酸，获得保护十肽树脂，其间依 次脱去Fmoc-保护基团的方法，包括如下步骤：

(1)制备Fmoc-Gly-树脂：

取所说的树脂用DMF浸泡0.5～2小时，使树脂充分溶胀，抽干，然后加入溶解于 接肽试剂的Fmoc-Gly-OH(FW:297.3)、TBTU/HBTU(FW:321)和HOBt(FW:153，)的混合 物，10～60℃反应0.5～4小时，抽干，分别用DMF和乙醇洗涤，抽干，获得Fmoc-Gly- 树脂；加入脱帽试剂，10～60℃反应5～60分钟，抽干，分别用DMF和乙醇洗涤，抽干。

所说的树脂取代量为：0.5-1.1mmol/g；

所说的接肽试剂为：NMM∶DMF＝1∶5～15，体积比，下同；

所说的脱帽试剂为：PIP∶DMF＝1∶2～5，体积比，下同；

混合物中：

树脂的重量体积浓度为5～20ml/g；

TBTU/HBTU的摩尔数为树脂的2～6倍；

HOBt的摩尔数为树脂的2～6倍；

Fmoc-Gly-OH的摩尔数为树脂的2～6倍。

树脂的重量与脱帽试剂的加入量的比例为5～20ml/g；

(2)制备Fmoc-Pro-Gly-树脂：

在步骤(1)的Fmoc-Gly-树脂中，加入脱帽试剂，10～60℃反应5～60分钟，抽干， 分别用DMF和乙醇洗涤，抽干，然后加入溶解于接肽试剂的Fmoc-Pro-OH(FW:337.4)、 TBTU/HBTU(FW:321)、HOBT(FW:153，)的混合物，10～60℃反应0.5～1.5小时，抽干， 分别用DMF和乙醇洗涤，抽干，获得Fmoc-Pro-Gly-树脂；加入脱帽试剂，10～60℃反 应5～60分钟，抽干，分别用DMF和乙醇洗涤，抽干。

所说的树脂取代量为：0.5-1.1mmol/g；

所说的接肽试剂为：NMM：DMF＝1：5～15，体积比，下同；

所说的脱帽试剂为：PIP：DMF＝1：2～5，体积比，下同；