[发明专利]固相多肽合成Exenatide的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及Exenatide的制备方法，尤其涉及固相多肽合成Exenatide的制备方法。

背景技术

中文名：艾赛那肽、醋酸艾赛那肽。

商品名：。英文名：Exenatide Acetate。

结构式：His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Leu-Ser-Lys-Gln-Met-Glu-Glu-Glu -Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp(Boc)-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pr o-Pro-Ser-NH₂

分子式为：C₁₈₄H₂₈₂N₅₀O₆₀S

分子量为：4186.6

糖尿病是一种世界性疾病，全世界糖尿病患者已超过1.5亿患者，其中II型糖尿病患 者占90％。

在我国II型糖尿病患者将近4000万，随着生活水平的提高，发病率将越来越高， 且城市多于农村，由于患者须终生用药，因此治疗II型糖尿病的药物的市场每年在数百 亿人民币以上。Exenatide是一种治疗II型糖尿病的特效新药，在同类药物中具有极强 的竞争力。

美国专利6528486报导了制备Exenatide的方法，系采用TentaGel S-RAM树脂为 起始原料，用DIC/HOBt或DCC/HOBt为缩合剂，反应时间长，TentaGel S-RAM树脂 来源稀缺，价格昂贵(是Rink Amide AM树脂的五倍)；因此该方法限制了Exenatide 的大规模生产和使用。

发明内容

本发明的目的是提供一种固相多肽合成Exenatide的制备方法，以克服现有技术存 在的上述缺陷。

本发明的方法包括如下步骤：

以Rink Amide树脂、Rink Amide AM树脂或Rink Amide MBHA树脂为起始原料， 按照固相合成的方法依次连接具有Fmoc保护基团的氨基酸，获得保护的三十九肽树脂， 其间依次脱去Fmoc-保护基团，用TBTU/HOBt、HBTU/HOBt、BOP/HOBt、TBTU/HOAt、 HBTU/HOAt或BOP/HOAt中的任何一种为缩合剂，进行接肽反应，得保护的三十九肽 树脂后，同步进行脱侧链保护基团及切肽，获得Exenatide粗品，并经C18(或C8)柱 进行分离纯化，获得所说的Exenatide，然后可再经冷冻干燥，获得产品，包括：醋酸盐、 三氟醋酸盐等医学上可用的盐及游离碱。

按照本发明，优选的，依次连接具有Fmoc保护基团的氨基酸，获得保护的三十九 肽树脂，依次包括如下步骤：

(1)将Rink Amide树脂、Rink Amide AM树脂或Rink Amide MBHA树脂用DMF 或DCM浸泡10～60分钟，使树脂溶胀，树脂的重量体积浓度为5～20ml/g；

(2)在上述的树脂中，加入脱帽试剂，进行脱帽反应，然后树脂用DMF洗涤， 抽干，加入用接肽试剂溶解的具有Fmoc保护基团的氨基酸、TBTU/HOBt、HBTU/HOBt 或BOP/HOBt的混合物，10～60℃接肽反应0.5～5小时，抽干，分别用DMF、甲醇、DMF 洗涤，抽干，然后再加入脱帽试剂，脱帽反应，再加入用接肽试剂溶解的具有Fmoc保 护基团的氨基酸，如此重复，获得：

Fmoc-Gly-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Leu-Ser(tBu)-Lys(B oc)-Gln(Trt)-Met-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ala-Val-Arg(Pbf)-Leu-Phe-Ile-Glu(OtB u)-Trp(Boc)-Leu-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Gly-Gly-Pro-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-S er(tBu)-树脂；

所说的具有Fmoc保护基团的氨基酸，依次包括：