[发明专利]天麻多糖或其硫酸化衍生物及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种从天麻中提取的天麻多糖，其结构式如下：

其中x和y为整数且x+y＝16，

n为整数，其峰尖分子量为2.8×10⁵，在其0.5mg/ml水溶液中的比旋度为+95°。

2.一种如权利要求1所述的天麻多糖的硫酸化衍生物，该衍生物是天麻多糖主要在6位羟基上的硫酸化衍生物，其峰尖分子量为1.9×10⁵，在其0.5mg/ml水溶液中的比旋度为+142.8°。

3.一种从天麻中提取权利要求1所述的天麻多糖的方法，该方法步骤如下：

1)水提粗多糖的制备：干燥的天麻饮片，经乙醇脱脂、干燥后，用热水反复提取2～5次，合并提取液；所得提取液浓缩后用三氯乙酸脱蛋白，离心分离，所得上清液经中和、透析、浓缩，得到一浓缩液；加入2-5倍于浓缩液体积的乙醇，离心分离得沉淀，该沉淀经真空干燥，得水提粗多糖；

2)天麻多糖的制备：向上述步骤1)得到的水提粗多糖加入适量水溶解并离心，上清液用二乙基氨乙基纤维素为载体进行柱层析分离，分别以水、0.1～0.4mol/l NaCl溶液剃度洗脱，其中0.1mol/l NaCl洗脱液经浓缩、透析以及冷冻干燥得到白色絮状固体天麻多糖。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征是，在所述步骤1)中，取天麻干燥饮片，用95wt％乙醇脱脂1周，脱脂后室温自然干燥；干燥后，用100℃水反复浸渍天麻饮片数次，至提取液用硫酸-苯酚检测无明显反应，将每次的提取液合并后加热浓缩；所得浓缩液冷却后以15％(W/V)三氯乙酸溶液脱蛋白，离心分离，所得上清液用1mol/lNaOH中和至pH7.0，然后对流动水透析72h，内液浓缩至小体积，在搅拌下加入三倍体积的95wt％乙醇，静置过夜，倾去上清液，离心分离，所得沉淀依次用2倍体积的无水乙醇、丙酮洗涤以脱去水分，离心分离，所得沉淀置40℃下真空干燥，得水提粗多糖；

在所述步骤2)中，取水提粗多糖，用适量水溶解，离心除去不溶物，上清液通过二乙基氨乙基纤维素柱进行分离；逐步以水、0.1mol/lNaCl、0.2mol/l NaCl和0.4mol/l NaCl洗脱，用硫酸-苯酚法绘制洗脱曲线，根据洗脱曲线分别收取合并洗脱液，其中0.1mol/l NaCl的洗脱液经浓缩，对蒸馏水透析，所得透析袋内液冷冻干燥得天麻多糖。

5.一种由权利要求1所述的天麻多糖制备权利要求2所述的天麻多糖硫酸化衍生物的方法，该方法步骤如下：经分子筛处理的吡啶冰浴冷却后，将氯磺酸逐滴加入到吡啶中制成酯化试剂；经分子筛处理的甲酰胺中溶解天麻多糖，该溶液冰浴冷却下，然后往该溶液中逐滴加入上述制备的酯化试剂；反应完毕，反应液调pH值至7.8，然后浓缩，所得浓缩液对饱和的NaHCO₃溶液透析后，换成对水透析；透析袋内液冷冻干燥得天麻多糖的硫酸化衍生物。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征是，该方法步骤如下：经分子筛处理的吡啶冰浴冷却后，以氯磺酸/吡啶V/V＝2:1的氯磺酸逐滴加入到吡啶中制成酯化试剂；每8ml 分子筛处理的甲酰胺中溶解158.9mg的天麻多糖，该溶液冰浴至0℃，然后往溶液中逐滴加入2ml新鲜制备的酯化试剂；加毕，45℃水浴反应4h；反应完毕，反应液用5mol/l NaOH调pH值至7.8，然后<30℃减压浓缩至小体积；浓缩液对2L饱和的NaHCO₃溶液透析24h后，换成对2L去离子水透析，每次24h，共三次；透析袋内液冷冻干燥得天麻多糖的硫酸化衍生物。

7.如权利要求2所述的天麻多糖硫酸化衍生物作为登革热病毒抑制剂在制备治疗抗登革热病毒感染的疾病的药物中的应用。