[发明专利]天麻多糖或其硫酸化衍生物及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种从天麻中提取的天麻多糖，该多糖的硫酸化衍生物，以及从天麻中提取天麻多糖的方法和天麻多糖硫酸化衍生物的制备方法，本发明还涉及天麻多糖硫酸化衍生物在制备治疗抗登革热病毒感染的疾病的药物中的应用。

背景技术

登革热是一种热带和亚热带地区引起人类死亡的主要因素之一。至今仍缺乏专一性强、疗效好、毒副作用小的治疗药物。硫酸乙酰肝素蛋白聚糖是一类定位于细胞膜和细胞外基质中糖复合物。定位于细胞膜的硫酸乙酰肝素蛋白聚糖主要有多配体蛋白聚糖(syndecan)和磷脂酰肌醇锚定蛋白聚糖(glypican)两类。它们的糖链在病毒侵染过程中能够协助病毒进入宿主细胞。外源性的硫酸化多糖能够有效地阻断这一过程，比如肝素。由此硫酸化的多糖成为病毒感染开发的一个选择，最近成为登革热等病毒感染抑制剂研究的热点，高活性和低副作用的硫酸化多糖的寻找也就成为该类药物开发的重点。天麻(Gatrodiaelata BL.)是一著名的传统中药，目前未见其中多糖和多糖衍生物的正式报道。

本发明人从天麻中分离得到天麻多糖(WGESC1A)，通过硫酸化衍生得到的其硫酸化产物(WS45)，WS45具有显著的抗登革热病毒活性且在有效剂量下，毒副作用低。

发明内容

因此，本发明的目的在于提供一种从天麻中提取分离出的天麻多糖；

本发明的另一目的在于提供上述天麻多糖的硫酸化衍生物；

本发明的还一目的在于提供一种从天麻中提取天麻多糖的提取方法；

本发明的再一目的在于提供一种制备天麻多糖硫酸化衍生物的方法；

本发明的又一目的是提供天麻多糖硫酸化衍生物作为登革热病毒抑制剂在制备治疗抗登革热病毒感染的疾病的药物中的应用。

本发明的天麻多糖，其结构式如下：

α-D-Glcp-(1[→4)-α-D-Glcp-(1]x

                       ↓

                       6

-{[→4)-α-D-Glcp-(1]y→4-α-D-Glcp-(1→}n-

其中x和y为整数且x+y＝16，n为整数，其峰尖分子量为2.8×10⁵，其在0.5mg/ml水溶液中的比旋度为+95°。

本发明的天麻多糖硫酸化衍生物(WS45)为上述天麻多糖硫酸化衍生物，尤其是在6位羟基上的硫酸化衍生物，其峰尖分子量为1.9×10⁵，其在0.5mg/ml水溶液中的比旋度为+142.8°。

本发明提供从天麻中提取天麻多糖的提取方法，该方法步骤如下：

1)水提粗多糖(WGE)的制备：干燥的天麻饮片，经乙醇脱脂、干燥后，用热水反复提取2～5次，合并提取液；所得提取液浓缩后用三氯乙酸脱蛋白，离心分离，所得上清液经中和、透析、浓缩，得到一浓缩液；加入2-5倍于浓缩液体积的乙醇，离心分离得沉淀，该沉淀经真空干燥，得水提粗多糖WGE；

2)天麻多糖(WGESC1A)的制备：向上述步骤1)得到的水提粗多糖WGE加入适量水溶解并离心，上清液用二乙基氨乙基纤维素[DEAE-纤维素(Cl^-型)]为载体进行柱层析分离，分别以水、0.1～0.4mol/lNaCl溶液剃度洗脱，其中0.1mol/l NaCl洗脱液经浓缩、透析以及冷冻干燥得到白色絮状固体天麻多糖WGESC1A。

更具体而言，在步骤1)中，取天麻干燥饮片，用95wt％乙醇脱脂1周，脱脂后室温自然干燥；干燥后，用100℃水反复浸渍天麻饮片数次，至提取液用硫酸-苯酚检测无明显反应，将每次的提取液合并后加热浓缩；所得浓缩液冷却后以15％(W/V)三氯乙酸溶液脱蛋白，离心分离，所得上清液用1mol/l NaOH中和至pH7.0，然后对流动水透析72h，内液浓缩至小体积，在搅拌下加入三倍体积的95wt％乙醇，静置过夜，倾去上清液，离心分离，所得沉淀依次用2倍体积的无水乙醇、丙酮洗涤以脱去水分，离心分离，所得沉淀置40℃下真空干燥，得水提粗多糖WGE。