[发明专利]从蝴蝶兰克隆出的类黄酮－3'5'－羟化酶基因,其编码序列和应用

权利要求书

1.一种分离出的类黄酮-3’5’-羟化酶基因，其特征在于为具有特定序列的DNA分子，包含两个长分别为885bp和636bp的外显子，及两个外显子之间长为213bp的内含子，其核苷酸序列为SEQ ID NO.1。

2.一种由如权利要求1所述的类黄酮-3’5’-羟化酶基因编码的蛋白质分子，其特征在于长507个氨基酸残基，其氨基酸序列为SEQ ID NO.2。

3.一种用于检测样品中蝴蝶兰类黄酮-3’5’-羟化酶基因拷贝数的方法，其特征在于使用如权利要求1所述核苷酸序列SEQ ID NO.1对蝴蝶兰基因组DNA样品进行southern杂交，然后检测目的片段的有无，样品为蝴蝶兰的基因组DNA，经限制性内切酶酶切后的核苷酸片段。

4.用于调取获得蝴蝶兰样品中类黄酮-3’5’-羟化酶基因核苷酸引物序列，包括根据权利要求1所述类黄酮-3’5’-羟化酶基因家族保守区域设计的兼并引物，一系列RACE引物和反式PCR引物，这些引物序列如SEQ ID NO.3所示。

5.一种将如权利要求1所述的编码具有蝴蝶兰类黄酮-3’5’-羟化酶基因的核苷酸序列转入矮牵牛以改变花色的方法，具体步骤如下：

(1)将编码蝴蝶兰类黄酮-3’5’-羟化酶基因的核苷酸序列SEQ ID NO.1可操作的连接于植物表达载体，形成含有SEQ ID NO.1所示核苷酸序列的载体；

(2)将步骤(1)中的表达载体转入农杆菌，并将菌液与矮牵牛叶片混合培养；

(3)通过抗生素筛选，PCR鉴定，获得转化细胞并再生转基因植株。