[发明专利]利用重组大肠杆菌高效生产丙酮酸氧化酶的培养基

权利要求书

1.一种用于培养大肠杆菌的培养基，所述的培养基含有碳源、氮源、磷源、无机盐；所述的大肠杆菌中含有表达载体，所述的表达载体中含有丙酮酸氧化酶的表达盒；

其特征在于，所述的培养基中碳源90％以上是甘油。

2.如权利要求1所述的培养基，其特征在于，所述的培养基的碳源是甘油。

3.如权利要求2所述的培养基，其特征在于，所述的培养基含有：

甘油           6-18ml/L；

蛋白胨         12-20g/L；

酵母提取物     10-16g/L；

硫酸铵         3-7g/L；

硫酸镁         1-4g/L；

磷酸盐         4-8g/L；

氯化钠         6-15g/L。

4.如权利要求3所述的培养基，其特征在于，所述的磷酸盐是复合磷酸盐，其中，K₂HPO₄∶Na₂HPO₄∶KH₂PO₄＝1∶2∶1。

5.如权利要求3所述的培养基，其特征在于，所述的培养基中还含有微量元素1-2.2ml/L；其中所述的微量元素含有：

FeSO₄·7H₂O        12.8±3g/L；

ZnSO₄·7H₂O        2.84±1g/L；

CuSO₄·5H₂O        1.6±0.5g/L；

MnSO₄·H₂O         3.2±1g/L；

CaCl₂              0.28±0.08g/L；

CoCl₂·6H₂O        1.6±0.5g/L；

H₃BO₄              0.24±0.08g/L；

Na₂MoO₄            12.8±3g/L；和

KI                 0.16±0.05g/L。

6.如权利要求1所述的培养基，其特征在于，所述的大肠杆菌是E.coliDH5α/pSMLPyOD。

7.权利要求1所述的培养基的用途，其特征在于，用于培养大肠杆菌，发酵生产丙酮酸氧化酶；其中，所述的大肠杆菌中含有表达载体，所述的表达载体中含有丙酮酸氧化酶的表达盒。

8.一种生产丙酮酸氧化酶的方法，其特征在于，所述方法包括步骤：

(1)利用权利要求1所述的培养基培养大肠杆菌，获得培养产物；其中，所述的大肠杆菌中含有表达载体，所述的表达载体中含有丙酮酸氧化酶的表达盒；

(2)从步骤(1)获得的培养产物中分离获得丙酮酸氧化酶。

9.如权利要求8所述的方法，其特征在于，在步骤(1)中，培养时间是12-20小时；或者

培养的温度是28-37℃。

10.如权利要求8所述的方法，其特征在于，所述的大肠杆菌是E.coliDH5α/pSMLPyOD。