[发明专利]依博素的制备方法

权利要求书

1、依博素的制备方法，它包括菌种培养和多糖分离分化两个步骤：其中，菌种培养的具体步骤为：将于-70℃冷冻保存的菌种唐得链霉菌(Streptomyces tendae)接种于斜面26℃-37℃培养复壮，将培养复壮的种子斜面挖块接种至摇瓶26℃-37℃培养36-60小时，一级种子液接种于种子罐，于26℃-37℃培养36-60小时的二级种子液接种于发酵罐，于26℃-37℃培养80-160小时；

多糖分离分化的具体步骤为：板框过滤，大孔吸附树脂柱层析，阳离子交换树脂柱层析，超滤，沉淀，离心，得依博素湿沉淀物，再将依博素湿沉淀物过凝胶柱层析，洗脱液，超滤，喷雾干燥，得纯品依博素。

2、根据权利要求1所述的依博素的制备方法，其特征在于：菌种培养中，斜面培样基(％)：葡萄糖1，天门冬素0.5，K₂HPO₄ 0.05，琼脂2，自然pH，10磅消毒30分钟；种子培样基(％)：葡萄糖1，淀粉2，黄豆饼粉(热榨)2，胰蛋白胨0.2，牛肉膏0.2，酵母粉0.4，K₂HPO₄0.05，CaCO₃0.3，自然pH，121℃，15磅消毒30分钟；发酵培养基(％)：葡萄糖1.5，淀粉2.5，黄豆饼粉(热榨)2，胰蛋白胨0.2，牛肉膏0.2，酵母粉0.4，K₂HPO₄0.05，CaCO₃ 0.3，自然pH；121℃，15磅消毒30分钟。

3、根据权利要求1或2所述的依博素的制备方法，其特征在于：菌种培养的具体步骤为：将于-70℃冷冻保存的菌种接种斜面26℃-37℃培养5-10天，经1-3代复壮的种子斜面挖块接种至500ml三角瓶，在温度为26℃-37℃、转速为160-250rpm条件下旋转培养一级种子液，将培养36-60小时的一级种子液接种于200L种子罐，于26℃-37℃、搅拌速度160-250rpm条件下搅拌通气培养二级种子液，将培养36-60小时的二级种子液接种于5吨发酵罐，发酵罐温度26℃-37℃、搅拌速度160-250rpm、空气流量消后3-9m³/min、罐压0.01-0.09Mpa条件下搅拌通气培养80-160小时。

4、根据权利要求1所述的依博素的制备方法，其特征在于：多糖分离分化的具体步骤中板框过滤中：可在发酵液中加入3％(g/ml)助滤粉。

5、根据权利要求1所述的依博素的制备方法，其特征在于：多糖分离分化的具体步骤中大孔吸附树脂柱层析，树脂用量为滤液体积的5-7％。

6、根据权利要求1所述的依博素的制备方法，其特征在于：多糖分离分化的具体步骤中阳离子交换树脂柱层析树脂用量为样品液体积的5-7％。

7、根据权利要求1所述的依博素的制备方法，其特征在于：多糖分离分化的具体步骤中沉淀方法为：加入4倍体积(v/v)的95％工业酒精沉淀，沉淀液静置，取沉淀液。以上。

8、根据权利要求1所述的依博素的制备方法，其特征在于：多糖分离分化的具体步骤中超滤用截留分子量为8万的滤膜超滤器超滤离子为止，可浓缩洗脱液5倍以上。