[发明专利]从红豆杉中提取分离紫杉醇及其它紫杉烷类化合物的方法

说明书

(一)技术领域：

本发明涉及从天然植物中提取分离紫杉醇及其它紫杉烷类化合物的方法，具体涉及从红豆杉中提取分离紫杉醇及其它紫杉烷类化合物的方法。

(二)背景技术：

紫杉醇(paclitaxel，商品名Taxol)是从红豆杉属植物中分离得到的一种具有独特抗癌作用的二萜类化合物。它在临床上广泛应用于卵巢癌、乳腺癌、小细胞和非小细胞肺癌、食道癌、头颈癌、抗化疗白血病等多种癌症的化疗，具有确切的疗效。作为唯一促进微管聚合的抗癌新药，紫杉醇产品Taxol和Taxotere已成为主要的抗癌药物之一。制备紫杉醇的方法包括：1)自紫杉或其它可再生的紫杉属植物中提取Taxol；2)自其它天然紫杉烷(10-去乙酰基巴卡亭III)化合物半合成Taxol或Taxotere；3)从头全合成。目前为止，仅仅提取和半合成方法实现了产业化，因紫杉醇结构复杂，已报道的全合成方法路线长、收率低、成本极高，很难达到产业化的要求。在上述方法中，常采用从紫杉属植物中提取的方法制备紫杉醇，其步骤一般为：浸出(或超声或微波提取)————脱脂——萃取得到粗提物——2-3次工业色谱分离——结晶——溴化——正相色谱分离——重结晶得产品；并在此基础上发展了许多改进工艺，包括固相萃取和专用反相柱的使用以及省去溴化过程等，如申请号为01110208.X，名称为<<一种联合制备高纯度紫杉醇、三尖杉宁碱、10—脱乙酰基巴卡亭III的方法>>的中国发明专利，公开了一种从紫杉植物的树叶、树皮或树枝的醇提取物中联合生产高纯紫杉醇、10—脱乙酰基巴卡亭III和三尖杉宁碱的方法，它是用乙酸丁酯溶解醇提取物后，用碳酸氢钠溶液反萃取去除杂质，将有机相减压蒸发除去溶剂，然后用乙腈溶解残渣，冷冻结晶得到10—脱乙酰基巴卡亭III；以结晶后的母液为原料，用以高分子填料为固定相的反相色谱法分离和纯化三尖杉宁碱和紫杉醇；在反相色谱法运作中，采用冷冻结晶法分离洗脱液中的有效成分，再结合以硅胶为固定相的正相色谱法深度纯化紫杉醇产品，其纯度可达99.6％以上。

(三)发明内容：

本发明将提供一种从红豆杉中提取分离紫杉醇及其它紫杉烷类化合物的方法，其中，所述其它紫杉烷类化合物为三尖杉宁碱、10-去乙酰基紫杉醇、巴卡亭III、10-去乙酰基巴卡亭III、7-木糖基-紫杉醇、7-表-紫杉醇和7-木糖基-10-去乙酰基紫杉醇。

本发明从红豆杉中提取分离紫杉醇及其它紫杉烷类化合物的方法，它包括：提取——脱脂——萃取——分别对有机相和水相进行粗分离——反相色谱精分离——结晶；

其中，所述提过程取为依次用体积浓度80-95％、60-75％和20-55％的乙醇对红豆杉原料进行提取；可采用红豆杉的树皮或枝叶为原料，将其在阴暗处自然晾干后粉碎至40-100目再进行提取；所述乙醇的用量一般为红豆杉原料重量的5-8倍v/w；提取的时间最好为5-8小时；合并三次提取所得的提取液，回收乙醇后，浓缩至红豆杉原料重量的5-10倍，得到提取液；

所述脱脂过程为向浓缩后的提取液中加入等体积的非极性溶剂脱酯三次，收集水层，浓缩后得到脱酯提取液；所述非极性溶剂可选自6号溶剂汽油、120号溶剂汽油、石油醚、正己烷中的任意一种；

所述萃取过程为将脱酯提取液用与其等体积的低碳链酯萃取三次，分别合并三次萃取所得的有机相和水相；其中，所述低碳链酯可选自乙酸乙酯、乙酸正丙酯、乙酸异丙酯、乙酸丁酯或乙酸异戊酯中的任意一种；

所述对有机相进行粗分离是将萃取所得的有机相减压浓缩，得到浸膏A；将浸膏A先上氧化铝层析柱，氧化铝层析柱所填充的氧化铝可为浸膏A的20-50倍(w/w)；可用低碳链酯和溶剂汽油的混合液作为洗脱剂进行洗脱，其中，低碳链酯和溶剂汽油的体积比最好为1：9-9：1，所得洗脱液减压浓缩得到浸膏B；将浸膏B用丙酮溶解，得到拌有浸膏B的丙酮溶液，其中，丙酮的用量以能溶解浸膏B为适量；将拌有浸膏B的丙酮溶液与去活性硅胶均匀混合(丙酮的体积：去活性硅胶重量＝2：1)，再将其加载到上样量的30-100倍(w/w)的正相硅胶柱上，用低碳链酯和溶剂汽油的混合液作为洗脱剂进行洗脱，其中，低碳链酯和溶剂汽油的体积比最好为1：9-9：1；分段收集紫杉醇及其它紫杉烷类化合物的洗脱液，进行减压浓缩、干燥后得到富集紫杉醇和其它紫杉烷类化合物的浓缩物A；上述过程中，所述低碳链酯与萃取过程中的选取范围相同；溶剂汽油可为6号溶剂汽油，或90号溶剂油，或120号溶剂汽油等，对于洗脱的方式最好采用梯度洗脱；