[发明专利]从银杏叶中提取分离银杏内酯A、B、C、J及白果内酯单体的方法

说明书

(一)技术领域：

本发明涉及从植物中提取有效成份的方法，具体涉及从银杏叶中提取分离银杏内酯A、B、C、J及白果内酯单体的方法。

(二)背景技术：

银杏树又称白果树，属裸子植物，是银杏科银杏属的唯一生存的老树种之一，其叶和果具有重要的药用价值。目前研究最多的是银杏叶提取物，它包括黄酮类化合物和银杏内酯类化合物。黄酮类化合物约有38种，总含量为22-27％；银杏内酯类化合物包括银杏内酯和白果内酯，总含量为5.4-6.6％。银杏内酯主要包括银杏内酯A、B、C、J和M单体；据文献报道，银杏内酯中各单体的药物功能有一定差异，其中，银杏内酯A、B对治疗心脑血管疾病具有显著疗效；而白果内酯对治疗神经系统疾病则药效独特，为了提高其药用治疗效果，有时必须将各单体分离纯化；由于白果内酯是倍半萜物质，而银杏内酯A、B、C、J、M是二萜类物质，它们的分子结构较为相似，极性差异也很小，致使银杏内酯类化合物中的各单体的提取与分离比较困难，只有少许企业将它们单独分离出来，如申请号为200410065104.7，名称为<<一种银杏内酯单体的分离纯化方法>>的中国发明专利，公开了一种银杏内酯单体的分离纯化方法，它是采用柱色谱—重结晶—超临界CO₂精制纯化组合工艺，制取高纯度的银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C、银杏内酯J、银杏内酯M和白果内酯；其中柱色谱采用正相或反相固定填料，使用水、乙酸乙酯、乙醇、甲醇、氯仿、石油醚等溶剂梯度洗脱，超临界CO₂精制纯化和晶型整理工艺条件为：压力≤100MPa，温度≤150℃，夹带剂为乙酸乙酯、乙醇等；由该方法分离所得的单体含量最高可达99.8％，总收率≥90％，但该方法采用了超临界CO₂精制纯化组合工艺，生产条件要求较高，相应的成本也较高。

(三)发明内容：

本发明将公开一种提取所得率高、所得各单体纯度高的从银杏叶中提取分离银杏内酯A、B、C、J及白果内酯单体的方法。

本发明从银杏叶中提取分离银杏内酯A、B、C、J及白果内酯单体的方法，其步骤如下：

1)取银杏叶，用由高到低不同浓度的乙醇进行提取，合并提取液，回收乙醇，得到浓缩后的提取液；

称取一定量的银杏叶，可先用体积浓度为60-80％的乙醇在50-70℃时对银杏叶提取1-3个小时，其中，银杏叶与乙醇的配比按银杏叶的重量：乙醇的体积=1∶8-10；将银杏叶分离出来，再用体积浓度为30-55％的乙醇在50-70℃时对银杏叶提取1-3个小时，其中，银杏叶与乙醇的配比按银杏叶的重量：乙醇的体积=1∶6-8；再将银杏叶分离出来，用体积浓度为10-25％的乙醇在50-70℃时对银杏叶提取1-3个小时，其中，银杏叶与乙醇的配比按银杏叶的重量：乙醇的体积=1∶5-7；合并提取液，回收乙醇，将提取液浓缩至银杏叶重量的8-10倍体积；

2)向浓缩后的提取液中加入乙酸乙酯萃取，回收有机相后浓缩至浸膏；

可向浓缩液中加入等体积的乙酸乙酯萃取，一般来说，萃取3次所达到的效果较好；

3)将步骤2)所得浸膏稀释后上选择性极性无孔吸附树脂柱，用乙醇洗脱，所得洗脱液回收乙醇后，再用乙醇结晶得到银杏内酯类化合物；

所述选择性极性无孔吸附树脂柱的型号可为ADS-15，或ADS-17，或ADS-F8；将步骤2)所得浸膏用50-200倍于其重量的水稀释后上柱，可先用水洗，直至流出液无色；然后再用体积浓度为50-70％的乙醇洗脱，所述洗脱剂的体积用量可为上述浸膏重量的30-60倍；将收集得到的洗脱液回收乙醇，浓缩至浸膏，再用体积浓度为50-80％的乙醇为溶剂结晶，所得结晶即为银杏内酯类化合物；

4)将银杏内酯类化合物结晶上硅胶柱，用正己烷和乙酸乙酯的混合液洗脱，分段收集洗脱液，依次分别得到白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C和银杏内酯J；

所述正己烷和乙酸乙酯的混合液中正己烷和乙酸乙酯的体积比最好为9∶1-2∶8；在洗脱的过程中，以蒸发光散射检测器在线检测定位，分段收集洗脱液，依次得到含有白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C和银杏内酯J的洗脱液；

5)回收步骤4)中收集的各洗脱液中的溶剂，再用乙醇结晶分别得到白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C和银杏内酯J单体。