[发明专利]检测痕量H2O2的酶催化四丁基溴化铵共振散射光谱法

说明书

技术领域：

本发明涉及H₂O₂的检测方法，特别是一种检测痕量H₂O₂的酶催化四丁基溴化铵共振散射光谱法。

背景技术：

H₂O₂俗名双氧水，是一种具有强氧化性、腐蚀性的无色重液体，可作为消毒剂、脱氯剂、漂白剂、氧化剂，并供制火箭燃料、有机或无机过氧化物、泡沫塑料和其他多孔物质等，被广泛应用于医药、国防、工业、农业、化工等领域中。由于它是许多过氧化酶催化反应的产物，在食物科学、药物科学和环境科学等领域，建立一种灵敏快速简便检测H₂O₂的方法尤为重要。目前，测定H₂O₂的方法主要有分光光度法、高效液相色谱法、荧光法、化学发光法和毛细管电泳等。在这些方法中，有的是灵敏度不高，有的是试剂不易获得，有的仪器复杂。

发明内容：

本发明的目的是要为克服现有技术的不足，而公开一种试剂易得，灵敏度高，检测快速的检测痕量H₂O₂的酶催化——四丁基溴化铵共振散射光谱法。

本发明的目的通过如下技术方案来实现：

本发明利用四丁基溴化铵(TBAB)缔合微粒共振散射光谱法检测H₂O₂，主要在酸性条件下，利用HRP可以催化H₂O₂并与过量的I^-反应生成I₃^-，I₃^-与四丁基溴化铵(TBAB)等形成缔合物微粒(TBAB-I₃)_n，该缔合物微粒存在共振散射效应。H₂O₂浓度在一定范围内与TBAB体系的共振散射光谱强度呈线性关系。据此建立了一种灵敏度高、选择性好、简便快速测定痕量H₂O₂的共振散射光谱新方法，其主要反应如下：

H₂O₂→·OH         (1)

·OH+I^-→OH^-+I₂    (2)

I₂+^I-→I₃^-         (3)

具体检测方法包括如下步骤：

1.制备已知H₂O₂浓度的测试体系；在具塞刻度试管中加入HAc-NaAc缓冲液，再在上述试管的溶液中分别加入KI、HRP、分别加入已知浓度的H₂O₂，摇匀，将摇匀后的溶液置于热水浴锅中，然后再加入TBAB，用二次蒸馏水稀释定容，摇匀，放置作为已知H₂O₂浓度的测试体系；

2.用步骤1的方法，但不加H₂O₂，制备试剂空白对照体系；

3.用荧光光度计同步扫描得到体系的共振散射光谱，在468nm处测定各体系的共振散射强度I_468nm和试剂空白I₀，计算ΔI_468nm＝I_468nm-I₀值；

4.依照已知浓度的测试体系的ΔI与H₂O₂浓度的对应关系作工作曲线；

5.依照步骤1的方法制备检测体系，其中加入的H₂O₂为未知浓度的被测物，求得被测物的ΔI；

6.再根据步骤4的曲线，计算出被测物中的H₂O₂浓度。