[发明专利]植物中外源基因的瞬时表达方法无效
| 申请号： | 200710055317.5 | 申请日： | 2007-02-06 |
| 公开（公告）号： | CN101096682A | 公开（公告）日： | 2008-01-02 |
| 发明（设计）人： | 王兴智;杨丽萍 | 申请（专利权）人： | 东北师范大学 |
| 主分类号： | C12N15/82 | 分类号： | C12N15/82;C12N15/87;C12Q1/68;G01N33/53;C12N15/29 |
| 代理公司： | 长春市东师专利事务所 | 代理人： | 刘延军;赵军 |
| 地址： | 130024吉*** | 国省代码： | 吉林;22 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 植物 中外 基因 瞬时 表达 方法 | ||
【权利要求书】：
1.植物中外源基因的瞬时表达方法，其特征是取4-5ml的农杆菌EHA105-30B-GFP重悬液，盛放于5ml离心管中，然后分别将四叶期五叶期和六叶期的带根小苗的根部直接放入重悬液中，然后将浸染材料在室温28℃，每天日光或灯光照射16h和黑暗8h的循环条件下进行培养，并在紫外灯照射条件下进行连续一周的观察并拍照，对表达绿色荧光蛋白GFP的植株分别提取植物总RNA和总可溶性蛋白，进行RT-PCR水平和蛋白水平Western-Blot上的检测；
其中农杆菌EHA105-30B-GFP由原始载体p35S-30B-GFP及原始菌种EHA105构建获得。
2.按照权利要求1的植物中外源基因的瞬时表达方法，其特征是植物材料为烟草Nb或Nb-Hc-Pro基因型，其中Nb-Hc-Pro为表达转录后基因沉默抑制子Hc-Pro的转基因烟草植物；用MMA重悬液重悬菌体，其中MMA重悬液成分为10mmol/L MgCl2，10mmol/LMes，100μmol/LAS；分别选择菌体重悬液OD600为0.58，0.82，1.05，1.25，1.41或1.62的浓度进行侵染，在侵染前静置3h。
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