[发明专利]犬、猫科动物重要疫病病原胶体金银联合检测试纸及其制备技术

权利要求书

1、一种犬、猫科动物重要疫病抗原胶体金银联合检测测试纸，其特征在于：衬板8封套在塑料夹1内，塑料夹1的表面开设有加样孔2和观察孔3，衬板8的表面上组装有经过处理的样品垫4、结合垫5、检测膜6和吸收垫7。其中，结合垫5由玻璃纤维素膜制成，上包被有金标RV、CDV、FPV和CPV等鼠源单抗；检测膜6由硝酸纤维素膜制成，上喷点有多条检测线和1条质控线，R、D、F、P等为检测线，分别包被有纯化犬抗RV、CDV、FPV和CPV等IgG；C为质控线，包被有兔抗鼠二抗；检测膜与吸收垫7连接。

2、根据权利要求1所述检测试纸的制备方法，包括下述步骤：

1)RV、CDV、FPV与CPV等病原单抗和多抗IgG的制备：分别用RV、CDV、FPV与CPV等病原接种各自敏感细胞，培养增殖各病毒，经浓缩提纯后分别免疫Balb/c小鼠和家犬，制备各病毒的单抗和多抗血清，并以此进一步制备其单抗与多抗IgG，于-30℃保存备用；

2)RV、CDV、FPV与CPV等病原固相免疫吸附载体的制备：应用所制备的RV、CDV、FPV与CPV等病原多抗IgG包被磁珠、乳胶颗粒等固相载体，分别制备上述病原的高效免疫吸附载体，并按适当比例混合，制成联合病原固相免疫吸附载体，加入防腐剂，于4℃保存备用；在样品前处理时，取待检样品3-5ml，加入适量固相免疫吸附载体，室温作用20-30分钟，离心或置于磁珠架沉淀磁珠，弃去上清，于所留免疫吸附载体中加50-100ml抗原抗体解离液用于检测；

3)金标RV、CDV、FPV与CPV单抗IgG的制备：采用胶体金蛋白标记技术，分别用胶体金标记所制备的RV、CDV、FPV与CPV单抗IgG，制得上述病毒的金标IgG，制成抗原捕捉剂，加防腐剂，于4℃保存备用；

4)兔抗鼠IgG制备：以Balb/c小鼠IgG免疫家兔制备兔抗鼠血清，并从中提取IgG，制备兔抗鼠IgG，加防腐剂，于-30℃保存备用；

5)结合垫制备：将所制金标抗原捕捉剂喷涂于玻璃纤维素膜上，制成反应膜，干燥保存备用；

6)检测膜制备：将所制备的RV、CDV、FPV与CPV多抗IgG和兔抗鼠IgG，分别喷点于硝酸纤维素膜(NC)的检测线R、D、F、P处和质控线C处，制成检测膜，干燥保存备用；

7)检测试纸组装：按胶体金层析检测试纸制备要求，如图将上述所制备和选购的材料进行粘连、压制和裁切成检测试纸条，装入塑料夹内制成的检测卡，加干燥剂并分装、封闭于的塑料小袋，干燥保存；

8)银加强法相应试剂的配制：

活化液的配制：以去离子水配制0.05mol/L、PH3.8的柠檬酸盐缓冲液；

银染液的配制：将乙酸银、对苯二酚、阿拉伯树胶溶于去离子水中，使其终浓度分别为0.11％、0.35％-1.7％和7％-10％；

定影液的配制：20％的硫代硫酸钠水溶液。