[发明专利]犬、猫科动物重要疫病病原胶体金银联合检测试纸及其制备技术

说明书

技术领域：

本发明涉及一种犬、猫科动物重要疫病病原胶体金银联合检测试纸及其制备方法，用于犬、猫科动物狂犬病、犬瘟热、猫瘟热和犬细小病毒病等重要疫病的快速检测、诊断，属于动物疫病检测技术领域。

背景技术：

犬狂犬病、犬瘟热、猫瘟热和犬细小病毒病等犬、猫科动物重要疫病不仅严重危害我国毛皮经济动物产业，而且严重威胁着虎、狮、狼等多种珍希野生动物的健康，有的还可导致人的发病死亡。要从根本上控制这些疫病，首要的是对上述疫病的发生、流行作出及时、准确的监测。对于犬猫科动物重要疫病，目前国际上常用的病原检测方法有病毒分离、电镜观察、PCR或RT-PCR等方法，但这些方法都需要一定的仪器设备和较高的操作技术，影响了其在流行病学监测方面的应用。

胶体金是近年来发展起来的一种检测技术，由Faulk和Taylor(1971)首先用于免疫电镜，现在成了荧光素、放射性同位素和酶标记以外的一大补充。胶体金试纸是利用抗原抗体反应及免疫层析原理，将抗原或抗体以胶体金标记，当待检样品中含有与抗原或抗体特异结合的抗体或抗原时，就会发生聚集而产生肉眼可见的色带，具有简便、快速，结果直观、准确等优点。

发明内容：

本发明提供了一种犬、猫科动物重要疫病病原胶体金银联合检测试纸，能够简便、快速、准确地对犬、猫科动物体内含有的狂犬病病毒(RV)、犬瘟热病毒(CDV)、猫瘟热病毒(FPV)和犬细小病毒(CPV)等病原作出检测。

本发明还公开了上述检测试纸的制备工艺，适合于工业化生产。

本发明的解决方案是根据抗原抗体能特异结合的免疫学基本原理，利用胶体金免疫层析技术和银染加强技术，将胶体金标记的鼠源RV、CDV、FPV和CPV等单抗混合包被在玻璃纤维素膜上，制成结合垫；分别将纯化的犬抗RV、CDV、FPV和CPV等的IgG包被在硝酸纤维素膜(NC)的检测线R、D、F、P处，将兔抗鼠IgG包被在硝酸纤维素膜的质控线C处，制成检测膜；当被检样品中含有相应病毒时，可先与相应金标鼠源单抗结合，然后在层析作用下与相应检测线上的二抗结合并富集，再经银染液加强染色后形成肉眼可见的色带，进而根据显色结果进行判定。

本发明的具体制备工艺如下：是按附图1所示位置分别将相应试剂与材料喷点或包被于玻璃纤维素膜和硝酸纤维素膜，组成犬、猫科动物重要疫病病原联合检测试纸。将由玻璃纤维素膜制成的样品垫置于加样孔下；样品垫连接由玻璃纤维素膜制成的结合垫，结合垫上包被有胶体金标记的鼠源抗RV、CDV、FPV和CPV等单克隆抗体；结合垫后连接由NC膜制成的检测膜，检测膜上可有根据需要设置多条检测线和1条质控线，其中检测线R、D、F、P等分别为纯化的犬抗RV、CDV、FPV和CPV等IgG包被而成，质控线(C)为兔抗鼠二抗；检测膜后面连接有吸收垫；最后再按金标层析试纸制备要求，进行粘连、压制和裁切，制成该抗体联合检测试纸。

本发明与现有的技术相比较具有如下优点：检测试纸简便、适用、快速、经济、无污染、易操作和判读，不需要借助其它仪器设备，并可同时对多种犬、猫科动物重要疫病病原进行检测，特别适用于现场检测和流行病学调查等。本发明的制备方法科学、成本低、稳定性高、重复性好，易于制造、保存和运输。

附图说明

图1是本发明检测试纸的结构示意图：

图2是本发明检测试纸剖面图。

1-塑料夹、2-加样孔、3-观察孔、4-样品垫、5-结合垫(由玻璃纤维素膜制成，上包被有金标RV、CDV、FPV和CPV等鼠源单抗)、6-检测膜(由硝酸纤维素膜制成，上喷点有多条检测线和1条质控线，其中R、D、F、P等为检测线，分别包被有纯化犬抗RV、CDV、FPV和CPV等IgG；C为质控线，包被有兔抗鼠二抗)、7-吸收垫、8-衬板。

具体实施方式

通过以下实施例进一步举例描述本发明，并不以任何方式限制本发明，在不背离本发明的技术解决方案的前提下，对本发明所作的本领域普通技术人员容易实现的任何改动或改变都将落入本发明的权利要求范围之内。

实施例1

根据图1所示，本发明检测试纸结构如下：