[发明专利]色氨酸合成代谢途径加强的基因工程菌

权利要求书

1.一种含有色氨酸合成酶基因和磷酸甘油酸脱氢酶基因突变体的重组质粒，其特征是用下述方法制成：采用pET22b(+)单质粒多基因串联表达的策略，将色氨酸合成酶基因trpBA与磷酸甘油酸脱氢酶基因突变体M3serA基因串联，得重组质粒pET-T7promotor-M3serA-T7promotor-trpBA-T7terminator，命名为M3BAT-I。

2.一种色氨酸合成代谢途径加强的基因工程菌，其特征是用下述方法获得：以λDE3噬菌体侵染宿主菌Escherichisa coli 491，使溶源化后的命名为DE3-491的细菌的染色体上含有一拷贝由lacUV5控制的T7RNA聚合酶基因，将权利要求1的一种含有色氨酸合成酶基因和磷酸甘油酸脱氢酶基因突变体的重组质粒M3BAT-I转入感受态DE3-491后，成为一种色氨酸合成代谢途径加强的基因工程菌，命名为M3BAT-I+DE3-491。

3.一种敲除tnaA基因的色氨酸合成代谢途径加强的基因工程菌，其特征是用下述方法获得：(1)选取tnaA基因上下游侧翼序列片段与卡那霉素抗性基因kan^r，连接构建串联基因盒pET22b-tnaA5′-kan^r-tnaA3′，并将线性化片段tnaA5′-kan^r-tnaA3′通过Red同源重组系统替换掉权利要求2的命名为M3BAT-I+DE3-491的一种色氨酸合成代谢途径加强的基因工程菌染色体上的tnaA基因，导致该基因正常功能的丧失，得到色氨酸酶缺陷株，命名为M3BAT-I+DE3-491ΔT。

4.一种敲除tnaA基因的色氨酸合成代谢途径加强的基因工程菌的应用，其特征是包括下述步骤：将权利要求3的敲除tnaA基因的色氨酸合成代谢途径加强的基因工程菌按质量百分含量为3％-7％比例加入M63培养基中，37℃培养至OD₆₀₀达到1.0后，加入异丙基硫代半乳糖苷诱导培养，培养50-54小时。