[发明专利]一种分离和固定化酶的免疫磁性微球的制备方法及其应用

权利要求书

1、一种分离纯化和固定化目的酶的免疫磁性微球的制备方法，其特征在于：将活化后的磁性微球与金黄色葡萄球菌蛋白A溶液反应，采用PBS缓冲液充分洗涤；再将耦联有金黄色葡萄球菌蛋白A的磁性微球与抗目的酶的IgG抗体的多抗血清或者单抗腹水进行吸附连接；经PBS充分洗净后，采用戊二醛或二甲基庚二酸酯将金黄色葡萄球菌蛋白A和IgG交联固定在磁性微球表面，最后加入TBS缓冲液终止反应，充分洗净后即得到可用于目的酶的分离纯化和固定化的磁性微球，其酶的耦联量为1～10mg/mL。

2、根据权利要求1所述的方法，其特征在于所采用的磁性微球是含有羟基活性基团的磁性微球，即琼脂糖磁性微球、纤维素磁性微球或聚乙烯醇磁性微球。

3、根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于所述的目的酶为L-半胱氨酸脱巯基酶，抗目的酶的IgG抗体是抗L-半胱氨酸脱巯基酶抗体。

4、一种权利要求1所述的方法制备的免疫磁性微球的应用，其特征在于将免疫磁性微球用于从复杂的细胞裂解液中一步分离纯化目的酶；其分离纯化过程是将耦联有抗目的酶抗体的免疫磁性微球，与细胞裂解液于2～8℃振荡反应2～12小时；然后将其置于磁珠收集器上用于吸附固定磁性微球，除去反应液，经PBS充分洗净后，采用pH1.5～3.5的甘氨酸-盐酸缓冲液于2～8℃振荡解离吸附的目的酶；磁性分离微球，收集解离液，立即用pH6.5～10.0的PB缓冲液中和，可得到纯化的目的酶；该微球用PBS洗净后，于2～8℃保存可重复使用。

5、根据权利要求4所述的应用，其特征在于所述的免疫磁性微球是固定有权利要求3所述的抗L-半胱氨酸脱巯基酶抗体的免疫磁性微球，并用于L-半胱氨酸的合成，具体过程如下：将上述免疫磁性微球加入到恶臭假单胞菌TS1138菌体裂解液中，分离吸附L-半胱氨酸脱巯基酶，然后收集免疫磁性微球，除去脱巯基酶的反应液可用于后续的微生物酶法转化L-半胱氨酸，提高合成L-半胱氨酸的转化率。

6、一种权利要求1所述的方法制备的免疫磁性微球的应用，其特征在于将免疫磁性微球用于目的酶的固定化，其过程是：将耦联有抗目的酶抗体的免疫磁性微球，与细胞裂解液混合，于2～8℃振荡反应2～12小时；然后将其置于磁珠收集器上用于吸附固定磁性微球，除去反应液，经PBS充分洗净后，固定有目的酶的免疫磁性微球即可用于对特定底物进行连续催化反应。