[发明专利]一种构建β-防御素2肿瘤疫苗的方法及其用途

说明书

技术领域

本发明涉及一种肿瘤疫苗的方法及其用途，尤其是构建β-防御素2肿瘤疫苗的方法及其用途。

背景技术

造血系统恶性肿瘤是危害人类的严重疾病，死亡率很高。目前常规的治疗方法是化疗和干细胞移植，但化疗药物特异性较低，在杀灭病人体内白血病细胞的同时，也杀灭正常血细胞及其祖细胞，抑制患者造血和免疫功能。干细胞移植虽然可以改善白血病患者的预后，但只有部分患者适合移植。而且，无论是化疗还是移植，只有约30％-50％的患者能达到长期无病生存。相当一部分患者残留白血病的复发和耐药问题始终未得到有效解决。

随着分子生物学和肿瘤免疫学等学科的研究进展，白血病的免疫治疗受人瞩目。因为，越来越多的证据表明，免疫系统在控制造血系统恶性肿瘤中起重要作用。最突出的例子是白血病患者异基因干细胞移植后出现的移植物抗白血病效应(GVL)，表明有效的免疫反应可治疗白血病。设想部分白血病在经典治疗的基础上，利用免疫治疗针对微小残留白血病细胞，达到根治目的。在实验研究方面，肿瘤免疫治疗已取得令人鼓舞的结果。美国国立卫生研究院(NIH)已批准包括白血病在内的多种疾患进行免疫治疗的临床试验。

在白血病免疫治疗策略中，细胞因子瘤苗研究是重点之一。因为，到目前为止，只鉴定出少数几个白血病相关肿瘤抗原。有些抗原的临床应用价值尚待确定。细胞因子瘤苗以主动免疫治疗为基础，将细胞因子基因转导肿瘤细胞，这些细胞因子有调控免疫应答，活化效应细胞的功能，可提呈多个白血病相关抗原却无须鉴定出这些抗原，激发机体产生显著的抗肿瘤免疫，达到治疗肿瘤的目的。另外，细胞因子瘤苗只在肿瘤细胞局部产生高浓度的细胞因子，避免了系统给药的副作用。所产生的旁分泌机制与体内生理调节机制极为类似。

目前肿瘤免疫治疗研究较多的细胞因子大多以调节获得性免疫为主。其中白细胞介素-12(IL-12)和GM-CSF是目前以瘤苗方式用于肿瘤免疫治疗的细胞因子中效果最好的，但在治疗黑色素瘤，头颈癌、乳腺癌及各种晚期肿瘤的I期、II期临床试验中，仅约半数病人对治疗有反应，肿瘤消退是暂时性的。因此，如何进一步提高免疫效果，仍面临着许多问题和挑战。

天然免疫在过去的几十年中曾一度被认为只是免疫系统应答外界刺激的一种低等形式，20世纪90年代后期其重要性才逐惭为人所认识。Science和Curr Opinion Immunol相继刊文揭示天然免疫对获得性免疫起直接的激活和导向作用。新近研究发现，天然免疫通过模式识别受体(patternrecognition receptor，PRR)识别肿瘤细胞。1997年Cell等杂志刊文论证就是PRR模式识别作用赋予免疫系统识别“自己”和“非己”的能力(MedzhitovR，Janeway CA Jr.Innate immunity:the virtues of a nonclonal system ofrecognition.Cell 1997 Oct 31；91(3):295-8)，而“自己”与“非己”的识别，是免疫学的根本问题。

β-防御素是在微生物感染时机体产生的一类天然免疫抗菌肽。2002年，Biragyn等在Science撰文证实β-防御素2(MBD2)不仅可趋化不成熟DC，趋化效果不亚于其他趋化因子，更为重要的是它通过一类PRR(Toll样受体4)激活DC成熟，产生一系列前炎症细胞因子、趋化因子，上调共刺激分子。Biragyn等进一步将MBD2与无免疫原性的肿瘤抗原基因融合作为DNA疫苗时，发现可以诱导有效的抗淋巴瘤细胞免疫反应，成为连接天然免疫和获得性免疫的桥梁(Biragyn A，Ruffini PA，Leifer CA，et al.Toll-likereceptor 4-dependent activation of dendritic cells by beta-defensin 2.Science2002 Nov 1；298(5595):1025-9.)。

但是Biragyn等的方法仅适用于已经鉴定出相关抗原的肿瘤，而事实上到目前为止，绝大多数肿瘤均未鉴定出相关抗原。而且Biragyn等仅在淋巴瘤中证实MBD2的抗肿瘤作用，其在白血病等其他恶性肿瘤中的作用尚不明确。

发明内容

本发明所要解决的问题是提供一种勿需鉴定出肿瘤相关抗原的构建β-防御素2肿瘤疫苗的方法及其用途。

为了解决上述问题，本发明构建β-防御素2肿瘤疫苗的方法，所述的β-防御素2用MBD2表示，包括以下步骤：

1)用脂多糖(LPS)刺激哺乳动物的皮肤，获得表达MBD2的皮肤组织；